[发明专利]高通量的单细胞全长转录组测序文库的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种高通量的单细胞全长转录组测序文库的构建方法，其特征在于：包括对细胞进行染色后，采用定制的微孔芯片和ICELL8平台系统识别单细胞，并且在微孔芯片的微孔中，对识别获得的单细胞依序进行细胞裂解、mRNA逆转录、cDNA预扩增和Tn5转座酶建库，获得可以直接用于后续测序的单细胞转录组测序文库；

其中，在mRNA逆转录过程中，添加5’端和3’端的双端Barcode序列，生成5’端和3’端分别具有Barcode序列的cDNA；

或者在Tn5转座酶建库的cDNA片段化过程，对核酸片段的5’端和3’端分别添加Barcode序列；

又或者在Tn5转座酶建库的片段化后DNA扩增过程时，分别在扩增的上下游引物中设计5’端Barcode序列和3’端Barcode序列；

通过5’端和3’端的双端Barcode序列，获得单细胞的全长转录组。

2.根据权利要求1所述的高通量的单细胞全长转录组测序文库的构建方法，其特征在于：所述Tn5转座酶建库依序包括以下步骤，(1)对cDNA预扩增的产物进行片段化；(2)对片段化的产物进行PCR扩增；(3)对PCR扩增产物进行片段选择；(4)对步骤(3)选择的片段进行单链DNA环化连接；(5)对单链DNA环化连接产物进行外切酶消化和磁珠纯化，获得可以直接用于后续测序的所述单细胞转录组测序文库。

3.根据权利要求1或2所述的高通量的单细胞全长转录组测序文库的构建方法，其特征在于：所述细胞进行染色具体包括，采用Hoechst和PI染料MIX对细胞进行染色。

4.根据权利要求1-3任一项所述的高通量的单细胞全长转录组测序文库的构建方法在单细胞测序中的应用。

5.一种高通量的单细胞测序方法，其特征在于：包括采用权利要求1-3任一项所述的高通量的单细胞全长转录组测序文库的构建方法，进行单细胞测序文库构建，然后采用高通量测序平台进行测序。

6.根据权利要求5所述的单细胞测序方法，其特征在于：所述高通量测序平台为BGISEQ-500平台。

7.根据权利要求5或6所述的单细胞测序方法，其特征在于：所述高通量测序采用一条链测三段的测序模式。

8.根据权利要求1-3任一项所述的高通量的单细胞全长转录组测序文库的构建方法或权利要求5-7任一项所述的单细胞测序方法在制备发育研究或癌症研究的检测试剂盒、检测装置或检测系统中的应用。