[发明专利]一种鸡促黄体素释放激素重组抗原去势疫苗及其制备方法

摘要

本发明提供了一种鸡促黄体素释放激素重组抗原去势疫苗及其制备方法，该方法包括(1)设计cLHRH基因；(2)对设计的基因序列进行合成、退火、酶切、连接，然后再转入大肠杆菌感受态细胞，得到重组质粒；(3)制备原始菌液；(4)乳糖诱导；(5)低温渗透休克分离纯化；(6)采用10×醛化盐水醛化；(7)配苗。该制备方法简单，成本低，在整个制备过程不涉及任何对动物具有潜在的有毒、有害或难以降解的物质，制得的疫苗对去势效果好，方便使用，稳定性好。

主权项

一种鸡促黄体素释放激素重组抗原去势疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)设计cLHRH基因，序列如下：P1:5’‑GGCCATGGCTGAACACTGGTCCTACGGTCTGCGTCCGAACGGCGGTGAGCACTGGTCTTACGGCCTGCAGCCGGGTGGCGGTGAACATTGGTCTTACGGTCTGCGCCCGAACTAATGAACTCGAGCA‑3’；P2:5’‑TGCTCGAGTTCATTAGTTCGGGCGCAGACCGTAAGACCAATGTTCACCGCCACCCGGCTGCAGGCCGTAAGACCAGAGCTCACCGCCGTTCGGACGCAGACCGTAGGACCAGTGTTCAGCCATGGCC‑3’；(2)对设计的基因序列进行合成、退火、酶切、连接，然后再转入大肠杆菌感受态细胞，得到重组质粒；(3)将重组质粒接种于含Amp的LB培养基中，于36‑37℃，160‑250r/min条件下培养，获得原始菌液；(4)将原始菌液按接种量为2％‑3％接种于含Amp的LB培养基中，于36‑37℃，160‑250r/min条件下培养，待菌液OD600nm值为0.6‑0.7时加入终浓度为20‑30g/L的乳糖诱导培养5‑6h；(5)将步骤(4)诱导培养后的菌液离心，弃上清，得第一沉淀，将第一沉淀置于2‑8℃高渗液中重悬，冰浴10‑15min，离心，弃上清，得第二沉淀，将第二沉淀置于2‑8℃低渗液中重悬，冰浴10‑15min，离心，收集上清液；(6)将步骤(5)所得上清液用0.22μm膜过滤除菌，然后加入除菌后所得液液1/10‑1/5体积的10×醛化盐水，混匀，置于2‑8℃，醛化处理72‑76h，得醛化后的蛋白液；(7)将醛化后的蛋白液中加入吐温‑80，混匀，得水相，其中吐温‑80占水相总体积的4％；将注射用白油与司本‑80按体积比为94:6比例，混匀，121℃灭菌60min，得油相；将油相与水相按体积比为2:1比例乳化，制成油包水乳剂，将油包水乳剂与1％吐温盐水按体积比为3:7比例乳化，制得鸡促黄体素释放激素重组抗原去势疫苗。