[发明专利]绒毡层细胞总蛋白提取方法在审
| 申请号： | 201710976855.1 | 申请日： | 2017-10-19 |
| 公开（公告）号： | CN107522771A | 公开（公告）日： | 2017-12-29 |
| 发明（设计）人： | 徐青;王静静 | 申请（专利权）人： | 宁夏大学 |
| 主分类号： | C07K1/30 | 分类号： | C07K1/30;C07K1/14 |
| 代理公司： | 宁夏合天律师事务所64103 | 代理人： | 郭立宁 |
| 地址： | 750021 宁夏回族*** | 国省代码： | 宁夏;64 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种分离、提取绒毡层细胞总蛋白的方法，内容包括总蛋白提取液配方、绒毡层细胞收集及其总蛋白提取与收集。总蛋白提取液主要成分Tris‑HCl、SDS、β‑巯基乙醇、TritonX‑100、Borax、EDTA、Vc、PVPP。细胞总蛋白提取流程为收集绒毡层细胞—研磨细胞—110℃，30min；80℃,2h—分离总蛋白溶液—低温沉淀蛋白—洗涤收集蛋白。该方法具有提取效率高、质量好、重复性好、操作简单方便、用时短等优点，为植物靶细胞精准蛋白质组学研究提供了很好的技术平台。 | ||
| 搜索关键词： | 绒毡层 细胞 蛋白 提取 方法 | ||
【主权项】：
绒毡层细胞总蛋白提取方法，其特征在于，该方法包括以下操作步骤：（1）收集固定绒毡层细胞于研磨器中；（2）加总蛋白提取液快速研磨绒毡层细胞，之后细胞研浆移入离心管，封住离心管的管口；（3）离心管置于金属浴中，110℃，保持30min；然后降至80℃,保持2h，期间20min混匀1次；（4）4℃，16000×g，15 min，离心分离修复总蛋白溶液；（5）修复总蛋白上清移入新离心管中，加5倍体积蛋白沉淀试剂，‑20℃过夜沉淀蛋白；（6）先后加3倍体积不同的蛋白洗涤试剂，轻轻混匀、静置10 min（冰浴中），4℃，16000×g，5 min，洗涤、分离总蛋白；（7）干燥总蛋白。
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