[发明专利]一种NK细胞的培养方法在审
| 申请号： | 201710875893.8 | 申请日： | 2017-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN107400659A | 公开（公告）日： | 2017-11-28 |
| 发明（设计）人： | 付强;栾希英;薛江楠;孙雨飞;王卓亚 | 申请（专利权）人： | 滨州医学院 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783;C12N5/09 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 264003 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明属于医学技术领域，公开了一种NK细胞的培养方法，包括以下步骤将外周血进行分离，得到PBMC细胞；备用；将常规培养的K562细胞接种于培养基中；接着更换无血清的DMEM培养液同步化，然后采用基础培养基重悬，加入IL‑2、IL‑15，进行细胞培养，每隔3天补液一次，培养至第6～7，8天时加入K562细胞，培养16～18天获得NK细胞；接种造模。本发明采用自体血清来促进细胞的增殖，避免了外源性蛋白及病毒的污染；本发明只需较低剂量的IL‑2，大大降低了生产成本；本发明培养方法培养出来的NK细胞纯度较高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 nk 细胞 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种NK细胞的培养方法，其特征在于，所述NK细胞的培养方法包括以下步骤：将外周血进行分离，得到PBMC细胞；备用；将常规培养的K562细胞接种于含10％～15％DMEM培养基中在36℃～37℃，6％～12％CO2培养箱中孵育至少15h～20h，使之完全贴壁80％后备用；先用无血清培基洗涤备用的K562细胞；接着更换无血清的DMEM培养液同步化8h～16h，然后加入2μmol/L～2.5μmol/L PBMC，置于36℃～37℃，10％～15％DMEM培养基培养箱中孵育60h～72h，从培养箱中取出，弃培养上清液，接着用0.01mol/L～0.05mol/L PBS溶液洗涤3次～6次，然后采用基础培养基重悬，加入IL‑2、IL‑15，进行细胞培养，每隔3天补液一次，培养至第6～8天时加入K562细胞，培养16～18天获得NK细胞；接种造模：用培养好的NK细胞接种于K562大鼠模型组；将NK细胞液0.05ml～0.1ml连续接种60天；分析大鼠食量、皮毛、体重、活动量表现。
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