[发明专利]一种雷帕霉素的分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种雷帕霉素的分离纯化方法。该方法包括以下步骤(1)分离收集发酵液和菌丝体；(2)超声搅拌处理菌丝体，得菌丝体提取液；(3)将发酵液和菌丝体提取液混合，萃取，脱色，过滤，然后再用90％～95％乙醇处理，蒸干，得雷帕霉素粗品；(4)硅胶柱层析；(5)重结晶，得分离纯化后的雷帕霉素。本发明可有效提升雷帕霉素的纯度和收率，且制备成本低。

主权项

一种雷帕霉素的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)收集含有雷帕霉素的发酵液，过滤，分离得到发酵液和菌丝体；(2)向菌丝体中加入为其3～5倍体积的丙酮，在20～30Hz、400～800r/min条件下搅拌1～2h，过滤，得菌丝体提取液；(3)将菌丝体提取液和发酵液胺体积比为1:1的比例混合，然后加入混合液2～3倍体积的乙酸乙酯‑丙酮混合物，萃取2～3次，每次3～5h，合并萃取液，向合并后的萃取液中加入活性炭，搅拌30～40min，过滤，减压浓缩，然后溶解，再加入溶解液1～2倍体积的90％～95％乙醇，搅拌均匀，静置30～50min，过滤，将滤液蒸干，得雷帕霉素粗品；其中，乙酸乙酯和丙酮的体积比为2～3.8:1～2.5；活性炭在萃取液中的浓度为0.05～0.12g/L；(4)用乙酸乙酯‑丙酮混合物溶解雷帕霉素粗品，并将其加入硅胶层析柱中，用乙酸乙酯‑丙酮混合物作为流动相进行梯度洗脱，每次洗脱2～3个柱体积，分段收集洗脱液，经薄层层析检测后，合并馏分；其中，乙酸乙酯和丙酮的体积比为1～2:0～20；(5)蒸干浓缩合并后的馏分，乙醇溶解，再用乙醚重结晶2～3次，得分离纯化后的雷帕霉素。