[发明专利]一种雷帕霉素的分离纯化方法

权利要求书

1.一种雷帕霉素的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)收集含有雷帕霉素的发酵液，过滤，分离得到发酵液和菌丝体；

(2)向菌丝体中加入为其3～5倍体积的丙酮，在20～30Hz、400～800r/min条件下搅拌1～2h，过滤，得菌丝体提取液；

(3)将菌丝体提取液和发酵液胺体积比为1:1的比例混合，然后加入混合液2～3倍体积的乙酸乙酯-丙酮混合物，萃取2～3次，每次3～5h，合并萃取液，向合并后的萃取液中加入活性炭，搅拌30～40min，过滤，减压浓缩，然后溶解，再加入溶解液1～2倍体积的90％～95％乙醇，搅拌均匀，静置30～50min，过滤，将滤液蒸干，得雷帕霉素粗品；其中，乙酸乙酯和丙酮的体积比为2～3.8:1～2.5；活性炭在萃取液中的浓度为0.05～0.12g/L；

(4)用乙酸乙酯-丙酮混合物溶解雷帕霉素粗品，并将其加入硅胶层析柱中，用乙酸乙酯-丙酮混合物作为流动相进行梯度洗脱，每次洗脱2～3个柱体积，分段收集洗脱液，经薄层层析检测后，合并馏分；其中，乙酸乙酯和丙酮的体积比为1～2:0～20；

(5)蒸干浓缩合并后的馏分，乙醇溶解，再用乙醚重结晶2～3次，得分离纯化后的雷帕霉素。

2.根据权利要求1所述的雷帕霉素的分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中所述搅拌条件为：28Hz、600r/min，搅拌2h。

3.根据权利要求1所述的雷帕霉素的分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)中所述乙酸乙酯和丙酮的体积比为2.8:1.4。

4.根据权利要求1所述的雷帕霉素的分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)中所述乙醇浓度为95％。

5.根据权利要求1所述的雷帕霉素的分离纯化方法，其特征在于，步骤(4)中所述梯度洗脱的具体过程为：

将乙酸乙酯和丙酮分别按照体积比为1:0、2:1、1:2、1:6、1:20的比例依次进行梯度洗脱，每次洗脱3个柱体积。