[发明专利]检测禽白血病病毒A/B/J亚群特异性抗体的试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及检测禽白血病病毒A/B/J亚群特异性抗体的试剂盒及其检测方法，属于分子生物学领域，该试剂盒包括发光微孔板、封口膜、受体微球Ⅰ、受体微球Ⅱ、供体微球、校准品和分析缓冲液；所述受体微球Ⅰ上标记禽白血病病毒A/B亚群His‑cENV蛋白，受体微球Ⅱ上标记禽白血病病毒J亚群His‑gp85蛋白；供体微球标记兔抗鸡二抗。检测是首先对采集的样本血清进行预处理，然后将受体微球Ⅰ、受体微球Ⅱ、供体微球和样本血清按要求加入到发光微孔板上，在680nm激发光下检测光信号值。该方法实现了对禽白血病病毒A/B/J特异性抗体的检测，不用洗涤，操作简单，检测灵敏，特异性和稳定性较强。

主权项

一种检测禽白血病病毒A/B/J亚群特异性抗体的均相化学发光试剂盒，其特征在于：包括发光微孔板、封口膜、受体微球Ⅰ、受体微球Ⅱ、供体微球、校准品和分析缓冲液；所述受体微球Ⅰ上标记禽白血病病毒A/B亚群His‑cENV蛋白，受体微球Ⅱ上标记禽白血病病毒J亚群His‑gp85蛋白；所述供体微球标记兔抗鸡二抗；所述受体微球Ⅰ、受体微球Ⅱ或供体微球的标记过程是通过以下方法实现的：将待标记物置于离心管中，加入磷酸盐缓冲液，离心、洗涤和悬浮，吸干上清后加入MES缓冲液，然后再依次加入经纯化的标记物、氰基硼氢化钠溶液和Tween‑20，2‑8℃避光旋转反应40～48h后，加入CMO避光37℃搅拌1h终止反应；离心去上清，加HEPES缓冲液重悬，离心去上清，加入保存液，制得偶联标记物的受体微球Ⅰ、受体微球Ⅱ或供体微球；校准品是由从多份高值血清混合成的阳性标准血清中提取的纯品抗体配制而成；所述分析缓冲液为50mmol/L、pH7.4的Tris‑HCl缓冲液，其中含有质量分数为0.8%的NaCl、质量分数为1%的牛血清白蛋白、质量分数为0.1%的酪蛋白、0.1%的表面活性剂S9、体积分数为0.1%的曲拉通‑100、体积分数为0.05%的Proclin‑300。