[发明专利]一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法

摘要

一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法，属于纳米传感检测领域。本发明方法将凝血酶的两种适配体DNA分子分别修饰到Au@Ag纳米粒子和Ag纳米粒子的表面，通过控制纳米粒子表面的DNA修饰量，在存在凝血酶的条件下通过适配体分子与凝血酶的结合，两种纳米粒子形成相间排列的链状结构，并具有较强的拉曼信号增强效果，凝血酶含量越高，链状结构越长，拉曼信号强度越强，根据凝血酶含量和拉曼信号强度的对应关系，可以实现凝血酶的定量检测。本发明方法操作简单、灵敏度高、并且可以实现血清样本中的凝血酶检测，同时这种纳米结构组装体为其它以适配体为识别分子的目标物检测提供了重要的理论基础。

主权项

一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）Au@Ag纳米粒子修饰凝血酶的一段适配体将新合成的Au@Ag纳米粒子在7000r/min的转速下离心10min，去除上清，用0.01M pH7.2的PBS缓冲液将纳米粒子进行重悬并浓缩两倍，测得纳米粒子的浓度为20nM，然后将29bp的凝血酶适配体DNA分子加入到Au@Ag纳米粒子溶液中，使得其终浓度为50nM，在室温下孵育4h，将纳米粒子在7000r/min条件下进行离心，以除去未结合的DNA分子，再用PBS缓冲液将纳米粒子进行重悬；29bp的适配体DNA序列：5’‑SH‑AGTCCGTGGTAGGGCAGGTTGGGGTGACT‑3’；（2）Ag纳米粒子修饰凝血酶的另一段适配体将新合成的Ag纳米粒子在10000r/min的条件下离心，去除上清并用0.01M pH7.2的PBS缓冲液将纳米粒子进行重悬，并进行5倍浓缩，测得Ag纳米粒子的浓度为20nM，将15bp的凝血酶适配体DNA分子加入到Ag纳米粒子溶液中，使得其终浓度为50nM，在室温下孵育4h，将纳米粒子在10000r/min条件下进行离心，以除去未结合的DNA分子，再用PBS缓冲液将纳米粒子进行重悬；15bp的适配体DNA序列：5’‑SH‑GGTTGGTGTGGTTGG‑3’；（3）链状纳米粒子的组装以及SERS信号进行凝血酶的检测在步骤（1）和步骤（2）制备的DNA修饰的纳米粒子中加入终浓度为2~10μM的信标分子，在室温下孵育2h后，将纳米粒子进行离心以去除未结合的信标分子，再用结合缓冲液将两种纳米粒子进行重悬；取等体积的两种纳米粒子溶液进行充分混合，然后将其分装到PCR管中，每管100μL，在每管中分别加入浓度为0pg/mL、0.001pg/mL、0.005pg/mL、0.01pg/mL、0.05pg/mL、0.1pg/mL、0.5pg/mL、1pg/mL的凝血酶分子，在室温下孵育30~60min后，测定每管中SERS信号的强度。