[发明专利]一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法

权利要求书

1.一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）Au@Ag纳米粒子修饰凝血酶的一段适配体

将新合成的Au@Ag纳米粒子在7000r/min的转速下离心10min，去除上清，用0.01MpH7.2的PBS缓冲液将纳米粒子进行重悬并浓缩两倍，测得纳米粒子的浓度为20nM，然后将29bp的凝血酶适配体DNA分子加入到Au@Ag纳米粒子溶液中，使得其终浓度为50nM，在室温下孵育4h，将纳米粒子在7000r/min条件下进行离心，以除去未结合的DNA分子，再用PBS缓冲液将纳米粒子进行重悬；

29bp的适配体DNA序列：5’-SH-AGTCCGTGGTAGGGCAGGTTGGGGTGACT-3’；

（2）Ag纳米粒子修饰凝血酶的另一段适配体

将新合成的Ag纳米粒子在10000r/min的条件下离心，去除上清并用0.01M pH7.2的PBS缓冲液将纳米粒子进行重悬，并进行5倍浓缩，测得Ag纳米粒子的浓度为20nM，将15bp的凝血酶适配体DNA分子加入到Ag纳米粒子溶液中，使得其终浓度为50nM，在室温下孵育4h，将纳米粒子在10000r/min条件下进行离心，以除去未结合的DNA分子，再用PBS缓冲液将纳米粒子进行重悬；

15bp的适配体DNA序列：5’-SH-GGTTGGTGTGGTTGG-3’；

（3）链状纳米粒子的组装以及SERS信号进行凝血酶的检测

在步骤（1）和步骤（2）制备的DNA修饰的纳米粒子中加入终浓度为2~10μM的信标分子，

在室温下孵育2h后，将纳米粒子进行离心以去除未结合的信标分子，再用结合缓冲液将两种纳米粒子进行重悬；取等体积的两种纳米粒子溶液进行充分混合，然后将其分装到PCR管中，每管100μL，在每管中分别加入浓度为0pg/mL、0.001pg/mL、0.005pg/mL、0.01pg/mL、0.05pg/mL、0.1pg/mL、0.5pg/mL、1pg/mL的凝血酶分子，在室温下孵育30~60min后，测定每管中SERS信号的强度。

2.根据权利要求1所述的一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法，其特征在于所述的步骤（1）中Au@Ag纳米粒子的粒径为50nm，Au核的粒径为20nm，Ag壳的厚度为15nm。

3.根据权利要求1所述的一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法，其特征在于所述的Ag纳米粒子的粒径为20nm。

4.根据权利要求1所述的一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法，其特征在于所述的信标分子为对4-ATP。

5.根据权利要求4所述的一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法，其特征在于所述的4-ATP的浓度为5μM。

6.根据权利要求1所述的一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法，其特征在于所述的步骤（3）中的结合缓冲液为含150mM甘氨酸、10mM KCl、pH8.5的0.01M Tris缓冲液。

7.根据权利要求1所述的一种SERS增强的可控链状组装体检测凝血酶的方法，其特征在于所述的步骤（3）中凝血酶和适配体修饰的纳米粒子的孵育时间为40min。