[发明专利]一种高纯度血清抗体的制备方法

摘要

本发明提供了一种高纯度血清抗体的制备方法，其包括，免疫动物的选择，免疫过程抗体效价的检测，血液的采集，两次的离心分离对抗血清的提取，第一次透析纯化，第二次阴离子交换层析纯化，最后进行脱盐浓缩，过滤除菌，对病毒的灭活处理，最后通过真空冷冻干燥，获得血清抗体。本发明提出的血清抗体的提取方法，工艺简单，成本低，品质好，稳定性好，效价优于其他方法制备的血清抗体。

主权项

1.一种高纯度血清抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)选择适龄、健康、无感染的动物，对动物进行免疫接种，在免疫过程中，动物的营养状况，以及饲养的卫生状况必须保持良好；(2)在末次免疫的7～10天后，对所述动物采集血样，检测其抗体效价，抗体滴度达到要求后，选择上午在动物空腹时用无菌取血器械抽取动物的动脉血液，加入原血量体积10％抗凝剂，搅拌使抗凝剂混合均匀；(3)将所述血液置于消毒灭菌后的离心管中在4℃下以2000～3000rpm转速离10～15min，取上清于灭菌袋中，置于‑20℃条件下冷冻；(4)取出冷冻的血清，使用消毒灭菌后的离心管以8000～12000rpm转速离心10～15min，取上清即为抗血清，置于灭菌袋中；(5)用无菌针管抽取所述抗血清于无菌双层反应釜中，加入生理盐水稀释，加入稳定剂，再加入1mol/L的盐酸将溶液pH值调至5.1～5.2，水浴加热，使反应釜内溶液的温度保持在65～75℃，反应持续60～80min，过滤后，收集滤液；(6)取所述滤液，用0.02mol/L的Tris‑HCl缓冲溶液于4℃透析，透析袋截留分子量为20000；(7)取透析过后的组分液，使用阴离子交换层析进一步纯化，使用0.2mol/L浓度氯化钠进行梯度洗脱；(8)取洗脱过后的组分液，进行脱盐浓缩，浓缩后的洗脱液采用膜过滤法去除抗血清中的病毒；(9)采用γ‑射线辐照法进行病毒灭活；(10)分离的抗血清加防腐剂真空冷冻干燥，即得抗体冻干粉。