[发明专利]一种高纯度血清抗体的制备方法

说明书

本发明提供了一种高纯度血清抗体的制备方法，其包括，免疫动物的选择，免疫过程抗体效价的检测，血液的采集，两次的离心分离对抗血清的提取，第一次透析纯化，第二次阴离子交换层析纯化，最后进行脱盐浓缩，过滤除菌，对病毒的灭活处理，最后通过真空冷冻干燥，获得血清抗体。本发明提出的血清抗体的提取方法，工艺简单，成本低，品质好，稳定性好，效价优于其他方法制备的血清抗体。

技术领域

本发明涉及治疗类生物制品领域，尤其是一种高纯的血清抗体的制备方法。

背景技术

抗体是与相应抗原特异性结合，发挥免疫功能，它是由效应B细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞，由浆细胞合成分泌的免疫球蛋白，主要存在于血清等体液中，是介导体液免疫的重要效应分子，目前，提取制备血清抗体最常见的方法盐析法、冷乙醇法、自然沉析法，有机溶剂沉淀法，但是存在着对血浆中的纤维蛋白去除不彻底，转化率较低，抗体品质不高的问题。

发明内容

为解决现有技术中存在的技术问题，本发明提供了一种高纯度血清抗体的制备方法。

为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

一种高纯度血清抗体的制备方法，包括以下步骤：

(1)选择适龄、健康、无感染的动物，对动物进行免疫接种，在免疫过程中，动物的营养状况，以及饲养的卫生状况必须保持良好；

(2)在末次免疫的7～10天后，对所述动物采集血样，检测其抗体效价，抗体滴度达到要求后，选择上午在动物空腹时用无菌取血器械抽取动物的动脉血液，加入原血量体积10％抗凝剂，搅拌使抗凝剂混合均匀；

(3)将所述血液置于消毒灭菌后的离心管中在4℃下以2000～3000rpm转速离10～15min，取上清于灭菌袋中，置于-20℃条件下冷冻；

(4)取出冷冻的血清，使用消毒灭菌后的离心管以8000～12000rpm转速离心10～15min，取上清即为抗血清，置于灭菌袋中；

(5)用无菌针管抽取所述抗血清于无菌双层反应釜中，加入生理盐水稀释，加入稳定剂，再加入1mol/L的盐酸将溶液pH值调至5.1～5.2，水浴加热，使反应釜内溶液的温度保持在65～75℃，反应持续60～80min，过滤后，收集滤液；

(6)取所述滤液，用0.02mol/L的Tris-HCl缓冲溶液于4℃透析，透析袋截留分子量为20000；

(7)取透析过后的组分液，使用阴离子交换层析进一步纯化，使用0.2mol/L浓度氯化钠进行梯度洗脱；

(8)取洗脱过后的组分液，进行脱盐浓缩，浓缩后的洗脱液采用膜过滤法去除抗血清中的病毒；

(9)采用γ-射线辐照法进行病毒灭活；

(10)分离的抗血清加防腐剂真空冷冻干燥，即得抗体冻干粉。

步骤(1)中所述动物为3～6岁的动物。

步骤(1)中所述动物为牛、马、羊、鹿中的一种。

步骤(2)中所述抗凝剂为4％的柠檬酸钠。

步骤(5)中所述生理盐水与抗血清的体积比为1:2。

步骤(5)中所述稳定剂为软脂酸钠。

步骤(5)中所述稳定剂按每100ml抗血清中加入0.7g的量加入。

步骤(5)中所述阴离子交换层析的填料为DEAE—纤维素。

步骤(8)中所述膜的孔径为0.5um。

本发明的有益效果为：