[发明专利]一种高纯度血清抗体的制备方法在审
| 申请号： | 201710638548.2 | 申请日： | 2017-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN109320604A | 公开（公告）日： | 2019-02-12 |
| 发明（设计）人： | 陈燕 | 申请（专利权）人： | 天津市正江现代生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/06 | 分类号： | C07K16/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300000 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 血清抗体 制备 高纯度血清 抗体 阴离子交换层析 真空冷冻干燥 过滤除菌 抗体效价 免疫动物 免疫过程 脱盐浓缩 次透析 血清 灭活 效价 病毒 采集 血液 对抗 检测 | ||
1.一种高纯度血清抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)选择适龄、健康、无感染的动物，对动物进行免疫接种，在免疫过程中，动物的营养状况，以及饲养的卫生状况必须保持良好；
(2)在末次免疫的7～10天后，对所述动物采集血样，检测其抗体效价，抗体滴度达到要求后，选择上午在动物空腹时用无菌取血器械抽取动物的动脉血液，加入原血量体积10％抗凝剂，搅拌使抗凝剂混合均匀；
(3)将所述血液置于消毒灭菌后的离心管中在4℃下以2000～3000rpm转速离10～15min，取上清于灭菌袋中，置于-20℃条件下冷冻；
(4)取出冷冻的血清，使用消毒灭菌后的离心管以8000～12000rpm转速离心10～15min，取上清即为抗血清，置于灭菌袋中；
(5)用无菌针管抽取所述抗血清于无菌双层反应釜中，加入生理盐水稀释，加入稳定剂，再加入1mol/L的盐酸将溶液pH值调至5.1～5.2，水浴加热，使反应釜内溶液的温度保持在65～75℃，反应持续60～80min，过滤后，收集滤液；
(6)取所述滤液，用0.02mol/L的Tris-HCl缓冲溶液于4℃透析，透析袋截留分子量为20000；
(7)取透析过后的组分液，使用阴离子交换层析进一步纯化，使用0.2mol/L浓度氯化钠进行梯度洗脱；
(8)取洗脱过后的组分液，进行脱盐浓缩，浓缩后的洗脱液采用膜过滤法去除抗血清中的病毒；
(9)采用γ-射线辐照法进行病毒灭活；
(10)分离的抗血清加防腐剂真空冷冻干燥，即得抗体冻干粉。
2.一种高纯度血清抗体的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述动物为3～6岁的动物。
3.一种高纯度血清抗体的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述动物为牛、马、羊、鹿中的一种。
4.一种高纯度血清抗体的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述抗凝剂为4％的柠檬酸钠。
5.一种高纯度血清抗体的制备方法，其特征在于：步骤(5)中所述生理盐水与抗血清的体积比为1:2。
6.一种高纯度血清抗体的制备方法，其特征在于：步骤(5)中所述稳定剂为软脂酸钠。
7.一种高纯度血清抗体的制备方法，其特征在于：步骤(5)中所述稳定剂按每100ml抗血清中加入0.7g的量加入。
8.一种高纯度血清抗体的制备方法，其特征在于：步骤(5)中所述阴离子交换层析的填料为DEAE—纤维素。
9.一种高纯度血清抗体的制备方法，其特征在于：步骤(8)中所述膜的孔径为0.5um。
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