[发明专利]一种从大规模鳍藻培养藻液中制备扇贝毒素-2标准样品的方法

摘要

本发明公开了一种从大规模鳍藻培养藻液中制备扇贝毒素‑2标准样品的方法，包括下列步骤：1）大规模培养藻液破碎；2）毒素提取；3）葡聚糖凝胶色谱柱分离；4）扇贝毒素‑2高效液相色谱分离；5）扇贝毒素‑2高效液相色谱纯化；6）检验所述标准样品的均匀性和稳定性。本发明采用高效液相色谱法制备扇贝毒素‑2，前处理简单快捷，易于操作；收集方法简单；制备的标准样品均匀稳定，且纯度达90%以上。

主权项

一种从大规模鳍藻培养藻液中制备扇贝毒素‑2标准样品的方法，其特征在于，包括下列步骤：1）大规模培养藻液破碎：取中国株鳍藻的大规模培养液，过10~15μm滤膜后于‑196°C左右液氮下冷冻；待冷冻完全后，将其置于室温下解冻；解冻完全再反复进行2次冻融；取室温解冻完全的藻液，置于冰水中，在冰浴条件下，使用超声波细胞破碎机进行细胞破碎；2）毒素提取：取经过破碎处理的藻液，依次用乙醚和二氯甲烷各萃取两次，经旋转蒸发浓缩后，合并提取液，进行进一步分离与纯化；3)葡聚糖凝胶色谱柱分离：取经有机试剂提取后的扇贝毒素样品提取液，加入活化后的葡聚糖凝胶柱，以甲醇洗脱，分段收集；根据HPLC‑MS/MS分析结果，选取含有扇贝毒素‑2的组分合并、浓缩，进行进一步的高效液相色谱的纯化；4）扇贝毒素‑2高效液相色谱分析：采用高效液相色谱法的分离条件：采用C18色谱柱，流动相组成为A：纯水（含6.7mM氨水）；B：乙腈/水（90:10，v/v，含6.7mM氨水），流速为1mL/min，柱温为40°C；确定目标色谱峰；5）扇贝毒素‑2高效液相色谱制备：色谱柱： C18柱，长250mm，内径4.8mm，粒度5μm；流动相：A：纯水（含有6.7mM氨水）；B：色谱纯乙腈/水（90:10，v/v，含有6.7mM氨水）流速：1mL/min；柱温：40°C；检测波长:235nm；根据扇贝毒素‑2的保留时间进行收集；将收集的组分利用旋转蒸发工艺去除试剂，即得扇贝毒素‑2标准品。