[发明专利]西瓜品种“京美”的特异性鉴定方法

摘要

本发明公开了一种西瓜品种“京美”的特异性鉴定方法。本发明所提供的西瓜品种“京美”的特异性鉴定方法包括如下步骤：以西瓜品种“京美”的基因组DNA为模板，采用28个核心SSR引物对分别进行PCR扩增，将扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据电泳图谱构建“0，1”矩阵(在凝胶相同迁移率位置上，有条带的记为“1”，无条带的记为“0”)；同样方法获得待测西瓜的“0，1”矩阵；将待测西瓜的“0，1”矩阵与“京美”的“0，1”矩阵进行比对。本发明构建的“京美”的“0，1”矩阵进与其他品种完全不同，能灵敏、高分辨地将其与其他品种区分，可有效用于“京美”的真伪鉴定，为“京美”的知识产权保护提供了有效的科学依据。

主权项

西瓜品种“京美”的特异性鉴定方法，包括如下步骤：(A)建立西瓜品种“京美”的特异性分子身份证，包括如下步骤：(A1)以西瓜品种“京美”的基因组DNA为模板，采用28个核心SSR引物对分别进行PCR扩增，得到扩增产物；其中，所述28个核心SSR引物对及每个引物对在西瓜种质资源范围内对应的理论上所有可能扩增片段的大小分别为如下a1)‑a28)：a1)由序列1和序列2所示两条DNA单链组成的引物对1；267bp、259bp、246bp；a2)由序列3和序列4所示两条DNA单链组成的引物对2；164bp、162bp、160bp、156bp；a3)由序列5和序列6所示两条DNA单链组成的引物对3；150bp、140bp；a4)由序列7和序列8所示两条DNA单链组成的引物对4；140bp、134bp；a5)由序列9和序列10所示两条DNA单链组成的引物对5；166bp、157bp；a6)由序列11和序列12所示两条DNA单链组成的引物对6；170bp、133bp；a7)由序列13和序列14所示两条DNA单链组成的引物对7；229bp、221bp；a8)由序列15和序列16所示两条DNA单链组成的引物对8；178bp、163bp；a9)由序列17和序列18所示两条DNA单链组成的引物对9；279bp、269bp；a10)由序列19和序列20所示两条DNA单链组成的引物对10；245bp、195bp、187bp；a11)由序列21和序列22所示两条DNA单链组成的引物对11；275bp、268bp、168bp；a12)由序列23和序列24所示两条DNA单链组成的引物对12；240bp、209bp；a13)由序列25和序列26所示两条DNA单链组成的引物对13；210bp、189bp；a14)由序列27和序列28所示两条DNA单链组成的引物对14；180bp、172bp；a15)由序列29和序列30所示两条DNA单链组成的引物对15；225bp、195bp；a16)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对16；299bp、278bp、245bp；a17)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对17；130bp、125bp；a18)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对18；175bp、165bp、145bp；a19)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对19；210bp、190bp、160bp、129bp；a20)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对20；210bp、158bp；a21)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对21；300bp、279bp、252bp；a22)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对22；190bp、165bp；a23)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对23；128bp、120bp；a24)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对24；184bp、170bp；a25)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对25；258bp、249bp；a26)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对26；174bp、168bp；a27)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对27；249bp、237bp；a28)由序列31和序列32所示两条DNA单链组成的引物对28；152bp、143bp；(A2)将所述扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据电泳图谱构建“0，1”矩阵；所述根据电泳图谱构建“0，1”矩阵的方法为：观察所述电泳图谱在每个参考条带位置有无条带出现，根据观察结果对所述电泳图谱中所有参考条带的出现与否按照特定顺序依次进行标记，有条带的记为“1”，无条带的记为“0”；所述所有参考条带为步骤(A1)中出现的所述28个核心SSR引物对在西瓜种质资源范围内对应的理论上所有可能扩增片段的条带，共66个；所述特定顺序为：所述28个核心SSR引物对按照步骤(A1)中a1)‑a28)的顺序排列，每个引物对在西瓜种质资源范围内对应的理论上所有可能扩增片段按照由大到小的顺序排列；所述“0，1”矩阵或由所述“0，1”矩阵转换而成的二维码即为西瓜品种“京美”的特异性分子身份证；(B)以待测西瓜的基因组DNA替代步骤(A1)和(A2)中的西瓜品种“京美”的基因组DNA，执行步骤(A1)和(A2)，得到所述待测西瓜的指纹图谱；所述待测西瓜的指纹图谱为所述待测西瓜的“0，1”矩阵或由所述“0，1”矩阵转换而成的二维码；(C)将所述待测西瓜的指纹图谱与所述西瓜品种“京美”的特异性分子身份证进行比对，从而确定所述待测西瓜是否为“京美”。