[发明专利]一种通过扩增子高通量测序技术检测sgRNA活性和特异性的方法在审
| 申请号： | 201710501021.5 | 申请日： | 2017-06-27 |
| 公开（公告）号： | CN109136351A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 赵书红;谢胜松;韩晓松;赵长志;苗义良;李新云;倪攀;刘向东;李长春;徐学文;马云龙;高杨;陈毅龙;杨高娟 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 王正君;马思敏 |
| 地址： | 430070 湖北省武*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种通过扩增子高通量测序技术检测sgRNA活性和特异性的方法。具体地，本发明的方法可同时获得目标靶点和非目标靶点的扩增子，通过对扩增子建库和高通量测序可获得多个sgRNA靶点和脱靶位点的基因组切割效率，同时还能获知其Indel突变序列特征，从而快速、简便、全面而准确地评估sgRNA的活性和特异性。 | ||
| 搜索关键词： | 扩增子 高通量测序技术 目标靶点 高通量测序 基因组切割 突变序列 检测 靶点 获知 建库 位点 评估 | ||
【主权项】：
1.一种利用扩增子高通量测序技术检测sgRNA活性和/或特异性的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(i)提供一待测样本，所述样本为基因组DNA样品，所述基因组DNA样品来自经基因组编辑技术编辑过的细胞或组织；(ii)对所述待测样本进行PCR扩增和纯化，获得扩增序列；(iii)在T4多聚核苷酸激酶存在下，修复所述扩增序列的平末端；(iv)对步骤(iii)所述的扩增序列，用接头序列进行接头连接；(v)补平对步骤(iv)所述的扩增序列的末端；(vi)对步骤(v)获得的扩增序列进行Indexing PCR；(vii)用高通量测序仪进行测序；以及(viii)分析所述的测序数据，从而获得检测结果，所述检测结果包括：sgRNA的活性和/或脱靶位点切割效率。
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