[发明专利]一种检测登革病毒和寨卡病毒的双重荧光定量RT-PCR试剂盒

摘要

本发明提供一种检测登革病毒和寨卡病毒的双重荧光定量RT‐PCR试剂盒。本试剂盒包含定量RT‐PCR反应液、酶混合液、引物探针混合液、标准品(DENV和ZIKV)、强阳性对照品(DENV和ZIKV)、弱阳性对照品(DENV和ZIKV)、阴性对照品。本发明分别根据DENV和ZIKV高度保守且型别间存在较小差异的polyprotein蛋白区设计DENV和ZIKV高特异性的引物探针。采用单管一步法双重实时荧光定量RT‐PCR，能够单管内一次反应同时检测出登革热病毒和寨卡病毒。该试剂盒具有较高的特异性和灵敏度，可应用于登革病毒和寨卡病毒引起暴发疫情的实验室应急诊断、快速筛查、临床诊断及发热出疹病毒的流行病学的研究。

主权项

一种检测登革病毒和寨卡病毒的双重荧光定量RT‑PCR试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含以下组分：定量RT‑PCR反应液、酶混合液、引物探针混合液、DENV标准品、ZIKV标准品、DENV强阳性对照品、ZIKV强阳性对照品、DENV弱阳性对照品、ZIKV弱阳性对照品、阴性对照品，其中定量RT‑PCR反应液管包含有PCR反应缓冲液管、酶混合物管、引物探针混合液管包含两组引物和相应的两种不同荧光标记的TaqMan‑MGB探针；所述PCR反应缓冲液管含氯化镁和三磷酸脱氧核糖核苷酸混合物，所述酶混合物管含耐热Taq DNA聚合酶、RNA酶抑制剂和MMLV逆转录酶，双重荧光定量RT‑PCR检测用上游引物和下游引物以及相应的特异性探针序列如下：上游引物DENV‑F:5’‑GACTAGYGGTTAGAGGAGACCCCTC‑3’下游引物DENV‑R：5’‑GCGYTCTGTGCCTGGAWTGAT‑3’特异性探针DENV‑P:5’‑FAM‑AGACCAGAGATCCTGCTGT‑MGB‑3’上游引物ZIKV‑F:5’‑GACTGGGTACCAACTGGGAGAAC‑3’下游引物ZIKV‑R:5’‑GGTCGTTCTCCTCAATCCACAC‑3’特异性探针ZIKV‑P:5’‑HEX‑GAAAGGGAGAATGGATGAC‑MGB‑3’。