[发明专利]一种检测登革病毒和寨卡病毒的双重荧光定量RT-PCR试剂盒

说明书

本发明提供一种检测登革病毒和寨卡病毒的双重荧光定量RT‐PCR试剂盒。本试剂盒包含定量RT‐PCR反应液、酶混合液、引物探针混合液、标准品(DENV和ZIKV)、强阳性对照品(DENV和ZIKV)、弱阳性对照品(DENV和ZIKV)、阴性对照品。本发明分别根据DENV和ZIKV高度保守且型别间存在较小差异的polyprotein蛋白区设计DENV和ZIKV高特异性的引物探针。采用单管一步法双重实时荧光定量RT‐PCR，能够单管内一次反应同时检测出登革热病毒和寨卡病毒。该试剂盒具有较高的特异性和灵敏度，可应用于登革病毒和寨卡病毒引起暴发疫情的实验室应急诊断、快速筛查、临床诊断及发热出疹病毒的流行病学的研究。

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及一种荧光定量RT-PCR检测试剂盒，具体涉及一种一步法双重实时荧光定量RT-PCR在同一个反应管内检测人或蚊标本中登革病毒和寨卡病毒的核酸检测方法，可应用于登革病毒和寨卡病毒引起暴发疫情的实验室应急诊断、快速筛查、临床诊断及登革病毒和寨卡病毒的流行病学的研究。

背景技术

登革病毒(dengue virus,DENV)和寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)均属于黄病毒科，黄病毒属，基因组为单股正链RNA。DENV依抗原性不同分为4种血清型：DENV-1、DENV-2、DENV-3和DENV-4，同一型别不同毒株可存在抗原差异，且各个型别之间抗原性存在一定的交叉。寨卡病毒依据基因型分为：亚洲型和非洲型两个基因型。登革病毒感染的天然宿主包括人和蚊子等，主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊等媒介昆虫传播。寨卡病毒在非人灵长类动物和蚊媒之间循环，人属于偶然宿主，且普遍易感，该病毒主要通过伊蚊传播，埃及伊蚊为主要传播媒介，而白纹伊蚊和非洲伊蚊等伊蚊也可传播，还存在母婴垂直传播、性传播和血液传播等方式。我国处于亚热带区域，南方部分地区(如广东和广西等)是埃及伊蚊和白纹伊蚊等蚊媒的流行地区，特别是伊蚊高发的夏秋季节，面临登革病毒和寨卡病毒暴发流行的高危地区。

登革病毒和寨卡病毒均广泛流行于热带和亚热带国家和地区，超过125个国家和地区出现登革病毒感染，70％感染人群发生在亚太地区，正逐渐向世界各地蔓延。寨卡病毒在非洲、亚洲、美洲和太平洋岛国地区均有该病暴发流行，疫情呈快速蔓延趋势。我国于1978年首次在广东佛山发现该病毒，以后在海南、广西、福建、浙江、云南等地均有发现，特别是2014年广东省登革热流行呈现近二十年来的高峰，感染人数超过4万，数人死亡；2015年台湾登革热流行造成超过3万人感染，死亡140多人。寨卡病毒于1947年首次在乌干达的恒河猴体内被发现，1952年在乌干达和坦桑尼亚的人体中分离到。2007年以前，全球仅报告14例寨卡病毒病散发病例，2007年首次在太平洋岛国密克罗尼西亚的雅普岛发现寨卡病毒暴发疫情。2015年巴西出现寨卡病毒的暴发流行，其后超过46个国家和地区有疫情报道，我国于2016年出现多例输入性寨卡病毒感染病例，疫情存在全球蔓延趋势。

登革病毒感染多数为无症状的隐性感染，发病者主要临床特征为登革热(denguefever,DF)、登革出血热(dengue hemorrhagic fever,DHF)和登革休克综合征(dengueshock syndrome,DSS)，出现后两者临床症状的死亡率较高。由于登革病毒易于发生变异且有4个血清型别，初次感染者恢复期的血清抗体仅对该血清型起到一定的保护作用，对其他血清型病毒感染不仅没有交叉保护作用，反而能够增强病毒的感染，导致更为严重的临床症状。寨卡病毒感染无症状者常见，仅约20％感染者出现症状，主要临床表现为低热、关节痛及皮肤斑丘疹等，不易于登革热等发热出疹的病毒性疾病区别。此外寨卡病毒具有极强的嗜神经性，其感染与格林-巴利综合征、新生儿小头畸形症存在一定关联，本病病死率低，感染后可获得终身免疫。