[发明专利]一种检测登革病毒和寨卡病毒的双重荧光定量RT-PCR试剂盒

权利要求书

1.一种检测登革病毒和寨卡病毒的双重荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含以下组分：定量RT-PCR反应液、酶混合液、引物探针混合液、DENV标准品、ZIKV标准品、DENV强阳性对照品、ZIKV强阳性对照品、DENV弱阳性对照品、ZIKV弱阳性对照品、阴性对照品，其中定量RT-PCR反应液管包含有PCR反应缓冲液管、酶混合物管、引物探针混合液管包含两组引物和相应的两种不同荧光标记的TaqMan-MGB探针；所述PCR反应缓冲液管含氯化镁和三磷酸脱氧核糖核苷酸混合物，所述酶混合物管含耐热Taq DNA聚合酶、RNA酶抑制剂和MMLV逆转录酶，

双重荧光定量RT-PCR检测用上游引物和下游引物以及相应的特异性探针序列如下：

上游引物DENV-F: 5’- GACTAGYGGTTAGAGGAGACCCCTC -3’

下游引物DENV-R：5’- GCGYTCTGTGCCTGGAWTGAT -3’

特异性探针DENV-P: 5’-FAM- AGACCAGAGATCCTGCTGT -MGB -3’

上游引物ZIKV-F: 5’- GACTGGGTACCAACTGGGAGAAC -3’

下游引物ZIKV-R: 5’- GGTCGTTCTCCTCAATCCACAC-3’

特异性探针ZIKV-P: 5’-HEX- GAAAGGGAGAATGGATGAC- MGB -3’；

所述DENV特异性探针的5’端采用FAM荧光标记，ZIKV特异性探针的5’端采用HEX荧光标记；DENV和ZIKV特异性探针的3’端的荧光淬灭标记物均采用MGB荧光染料标记；

所述DENV标准品和ZIKV标准品的保守区基因序列如下：

DENV标准品序列为：

GACTAGCGGTTAGAGGAGACCCCTCCCATCACTGACAAAACGCAGCAAAAAAGGGGGCCCGAAGCCAGGAGGAAGCTGTACTCCTGGTGGAAGGACTAGAGGTTAGAGGAGACCCCCCCAACACAAAAACAGCATATTGACGCTGGGAAAGACCAGAGATCCTGCTGTCTCTGCAACATCAATCCAGGCACAGAGCGC

ZIKV标准品序列为：

GACTGGGTACCAACTGGGAGAACCACCTGGTCAATCCATGGAAAGGGAGAATGGATGACCACTGAGGACATGCTCATGGTGTGGAATAGAGTGTGGATTGAGGAGAACGACC。

2.根据权利1所述的一种检测登革病毒和寨卡病毒的双重荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为高温高压灭菌的焦碳酸二乙酯处理水，所述强阳性对照为包含DENV和ZIKV的保守区基因序列的高浓度的阳性质粒样品，其质粒拷贝数为2×10⁶copies/mL，所述弱阳性对照为包含DENV和ZIKV的保守区基因序列的低浓度的阳性质粒样品，其质粒拷贝数为2×10⁴copies/mL。

3.根据权利要求1所述的一种检测登革病毒和寨卡病毒的双重荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征在于，引物探针混合液管为棕色管。