[发明专利]一种基于直接竞争荧光免疫法定量检测叶酸功能化二氧化硅靶向纳米药物载体的方法

摘要

本发明涉及一种基于直接竞争荧光免疫法定量检测叶酸功能化二氧化硅靶向纳米药物载体的方法，结合抗原、抗体反应的特异性与荧光的敏感性对SiO₂‑FO纳米粒子进行了定量检测分析。步骤包括：制备SiO₂‑FO包被抗原和免疫原，将免疫原注射到动物体内得到高特异性抗体，再将FITC标记上抗体制成荧光抗体，然后建立直接竞争荧光免疫法准确测定了SiO₂‑FO的含量。本发明检测方法操作简单、灵敏度高、特异性强、可实现高通量检测。

主权项

1.一种基于直接竞争荧光免疫法定量检测叶酸功能化二氧化硅（SiO₂‑FO）靶向纳米药物载体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：a、SiO₂‑FO包被抗原和免疫原的制备；b、抗SiO₂‑FO抗体的制备；所述抗SiO₂‑FO抗体的效价为1:64000；c、荧光抗体的制备；d、将SiO₂‑FO包被抗原经包被液稀释后包被于酶标板中，封闭、加入不同浓度的SiO₂‑FO标准品，以FITC标记的抗SiO₂‑FO抗体作为一抗，建立直接竞争荧光免疫分析定量检测SiO₂‑FO；e、以SiO₂‑FO标准品浓度的对数为横坐标，荧光强度值为纵坐标绘制标准曲线SiO₂‑FO标准品浓度的对数为横坐标，荧光强度值为纵坐标绘制标准曲线；所述标准曲线的线性方程为A=12434.4‑1136.7logC，其中A为荧光强度值，C为SiO₂‑FO浓度；所述步骤a具体包括以下步骤：a‑1、称取10~20mg SiO₂‑FO溶于1~2mL PBS溶液中，磁力搅拌1~2h即得到水溶性的SiO₂‑FO溶液；a‑2、称取10~20mg OVA溶于2~4mL PBS溶液中,并在搅拌下加入步骤a‑1得到的SiO₂‑FO溶液，混合均匀后再滴加80~200μL 25%戊二醛溶液，25~28℃下避光搅拌2~5h；将反应液置于透析袋中，用PBS透析24h后收集即可得到SiO₂‑FO包被抗原，其浓度为2~4mg/mL；a‑3、称取10~20mg BSA溶于2~4mL PBS溶液中，并在搅拌下加入步骤a‑1得到的SiO₂‑FO溶液，混合均匀后再滴加80~200μL 25%戊二醛溶液，25~28℃下避光搅拌2~5h；将反应液置于透析袋中，用PBS透析24h后收集即可得到SiO₂‑FO免疫原，其浓度为2~4mg/mL。