[发明专利]一种靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备方法及其应用

摘要

本发明属于医药技术领域，涉及一种靶向DNA纳米自组装体载NF‑κB decoy ODNs的制备方法及其应用。靶向DNA纳米自组装体载NF‑κB decoy ODNs由DNA四面体、NF‑κB decoy ODNs、VCAM‑1靶向多肽组成，其中NF‑κB decoy ODNs和VCAM‑1靶向多肽通过碱基互补配对原则连接到DNA纳米自组装体上。本发明的DNA纳米自组装体的平均粒径小于10nm。靶向多肽修饰的DNA纳米自组装体载NF‑κB decoy ODNs提高了基因药物的靶向性，提高了药物的体外抗炎效果，对细胞及组织基本无毒性。

主权项

1.一种靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备方法，其特征在于，步骤如下：/n（1）将四条单链直链DNA与组成NF-κB decoy ODNs的两条链NF- κB C、NF-κB D在体外缓冲盐溶液中，退火自组装形成TD-dODNs溶液；/n（2）ssDNA-Peptide：低速搅拌向ssDNA中滴加交联剂，在pH7~9条件下，室温反应2h，透析24h除去未反应的多肽，得到ssDNA-SMCC，然后加入VCAM-1靶向多肽，pH6.5~7.5条件下，反应8~12h，透析24h除去未反应的多肽，得到ssDNA-Peptide；/n（3）向步骤（1）中制备的TD-dODNs溶液中加入ssDNA-peptide，以2 min/℃的速度从40℃降至20℃，完成靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备；/n所述步骤（1）中四条单链直链DNA为单链直链S1、S2-F、S3、S4或单链直链S1、S2-F、S3-P、S4或单链直链S1-P、S2-F、S3-P、S4-F或单链直链S1、S2、S3、S4；四条单链直链DNA与NF- κB C和NF-κB D反应的物质的量比为：1:1:1:1：（1~3）：（1~3）；/n所述单链直链S1的序列如SEQ ID NO：1所示，单链直链S1-P的序列如SEQ ID NO：3所示，单链直链S2的序列如SEQ ID NO：4所示，单链直链S2-F的序列如SEQ ID NO：5所示，单链直链S3的序列如SEQ ID NO：6所示，单链直链S3-P的序列如SEQ ID NO：7所示，单链直链S4的序列如SEQ ID NO：8所示，单链直链S4-F的序列如SEQ ID NO：9所示，NF-ΚB C序列如SEQID NO：10所示，NF-ΚB D序列如SEQ ID NO：11所示。/n