[发明专利]一种靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将四条单链直链DNA与组成NF-κB decoy ODNs的两条链NF- κB C、NF-κB D在体外缓冲盐溶液中，退火自组装形成TD-dODNs溶液；

（2）ssDNA-Peptide：低速搅拌向ssDNA中滴加交联剂，在pH7~9条件下，室温反应2h，透析24h除去未反应的多肽，得到ssDNA-SMCC，然后加入VCAM-1靶向多肽，pH6.5~7.5条件下，反应8~12h，透析24h除去未反应的多肽，得到ssDNA-Peptide；

（3）向步骤（1）中制备的TD-dODNs溶液中加入ssDNA-peptide，以2 min/℃的速度从40℃降至20℃，完成靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备；

所述步骤（1）中四条单链直链DNA为单链直链S1、S2-F、S3、S4或单链直链S1、S2-F、S3-P、S4或单链直链S1-P、S2-F、S3-P、S4-F或单链直链S1、S2、S3、S4；四条单链直链DNA与NF- κB C和NF-κB D反应的物质的量比为：1:1:1:1：（1~3）：（1~3）；

所述单链直链S1的序列如SEQ ID NO：1所示，单链直链S1-P的序列如SEQ ID NO：3所示，单链直链S2的序列如SEQ ID NO：4所示，单链直链S2-F的序列如SEQ ID NO：5所示，单链直链S3的序列如SEQ ID NO：6所示，单链直链S3-P的序列如SEQ ID NO：7所示，单链直链S4的序列如SEQ ID NO：8所示，单链直链S4-F的序列如SEQ ID NO：9所示，NF-ΚB C序列如SEQID NO：10所示，NF-ΚB D序列如SEQ ID NO：11所示。

2.如权利要求1所述的靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中体外缓冲盐溶液为将MgCl₂溶于浓度5~20mM的Tris·HCl溶液中，MgCl₂的终浓度为5~20mM。

3.如权利要求1所述的靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中退火条件为95℃保持5min，10s内由95℃降温至4℃，4℃保持30s。

4.如权利要求1所述的靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，ssDNA序列如SEQ ID NO：12所示，其3’端C7经氨基修饰；交联剂为Sulfo-SMCC溶液；VCAM-1靶向多肽序列如SEQ ID NO：11所示；ssDNA：VCAM-1靶向多肽的物质的量比为20:1。

5.如权利要求1所述的靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，ssDNA-peptide：TD-dODNs的物质的量比为1：（1~2）。

6.如权利要求1所述的靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备方法，其特征在于：所述DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的平均粒径小于10nm。

7.权利要求1-6任一项所述的靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs作为制备抗类风湿性关节炎免疫治疗药物的应用。