[发明专利]一种靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备方法及其应用

说明书

本发明属于医药技术领域，涉及一种靶向DNA纳米自组装体载NF‑κB decoy ODNs的制备方法及其应用。靶向DNA纳米自组装体载NF‑κB decoy ODNs由DNA四面体、NF‑κB decoy ODNs、VCAM‑1靶向多肽组成，其中NF‑κB decoy ODNs和VCAM‑1靶向多肽通过碱基互补配对原则连接到DNA纳米自组装体上。本发明的DNA纳米自组装体的平均粒径小于10nm。靶向多肽修饰的DNA纳米自组装体载NF‑κB decoy ODNs提高了基因药物的靶向性，提高了药物的体外抗炎效果，对细胞及组织基本无毒性。

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备方法及其应用。

背景技术

核因子-κB/ Rel转录因子家族在协调参与免疫和炎症过程的几种基因的表达中起着中心作用，NF-κB 几乎在所有细胞的细胞质中都有表达，正常情况下，NF-κB通常是抑制性蛋白（IκB）与p50和p65亚基结合的异源二聚体，但在炎症介入的疾病的相关细胞中，细胞被多种因子激活，如促炎细胞因子，细菌脂多糖（LPS）和佛波酯等，NF-κB 被激活，NF-κB的抑制剂IκB 会被磷酸化而被降解，并释放脱离了IκB 的P50/P65 复合体，P50/P65 复合体进入细胞，启动各种炎症基因的转录和表达。基因药物NF-κB decoy ODNs可以特异性地结合NF-κB 的P50/P65 复合体，与P50/P65 复合体特异性结合后可阻止NF-κB 进入细胞核，抑制炎症基因的转录，抑制炎症因子的产生，从而降低炎症反应。

NF-κB decoy ODNs与传统治疗方法相比，能特异性结合核因子-κB ，从根源上改善炎症的发生，从而达到治疗目的，与传统药物相比，具有高效低毒的优势。然而游离的NF-κB decoy ODNs由于细胞膜传递性差，在体内易受酶的降解，靶向性差而极大地限制了其发挥作用。DNA纳米自组装体本身具有良好的稳定性，良好的生物相容性，大小和形状的高度可

控性等优点，DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs将显著提高NF-κB decoyODNs 在体内外的稳定性和疗效，而且NF-κB decoy ODNs 纳米组装体通过高效阻止炎症反应，可有效控制疾病发展。

血管内皮细胞黏附分子（Vascular cell adhesionmolecule-1, VCAM-1），是一个90K~110K 道尔顿的糖蛋白，其在炎症滑膜血管内皮细胞、炎症巨噬细胞和炎症成纤维样滑膜细胞表面均呈现高表达,主要与存在于白细胞和嗜酸性粒细胞表面的受体α4整合素家族的α4β1(又称very lateantigen 4,VLA-4)结合,介导并增强白细胞向血管内皮细胞和炎症成纤维样滑膜细胞的黏附，从而增强白细胞向滑膜关节腔的渗入和停留；参与淋巴细胞的活化、迁移和造血细胞的生长发育,并在肿瘤、炎症转移等病理过程中起重要作用。在DNA纳米自组装体体上修饰VCAM-1 靶向多肽，将使纳米组装体像白细胞一样易于向发炎滑膜聚集。由于滑模腔内的炎症细胞表面高表达VCAM-1，因此被VCAM-1靶向多肽修饰的NF-κBdecoy ODNs 纳米组装体可主动靶向于滑模腔内的炎症细胞，提高整体的抗炎效果，达到高效低毒治疗类风湿性关节炎的目的。

目前，通过DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs并修饰VCAM-1靶向多肽形成的药物传递系统在治疗类风湿性关节炎的应用中尚未报道。

发明内容

本发明为解决NF-κB decoy ODNs在治疗类风湿性关节炎中稳定性差、抗炎效果不佳、副作用大的技术难题，公开了一种靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备方法及其应用。

为解决上述技术难题，本发明采用以下技术方案：

一种靶向DNA纳米自组装体载NF-κB decoy ODNs的制备方法，步骤如下：