[发明专利]一种表皮细胞大规模培养方法在审
| 申请号： | 201710460503.0 | 申请日： | 2017-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN107151647A | 公开（公告）日： | 2017-09-12 |
| 发明（设计）人： | 张小波;卢永波 | 申请（专利权）人： | 广东博溪生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 523808 广东省东莞市松山湖高新技术产业开发*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种表皮细胞大规模培养方法，将扩增后的表皮种子细胞与培养液混匀重悬后，均匀接种于细胞工厂中，放入CO2培养箱，在37℃、5% CO2浓度条件下进行培养，根据传代需求培养一段时间后收获细胞；向细胞工厂加入消化液，孵育至大部分细胞不再贴壁时，立即将工厂内液体转移到装有终止液的容器中终止消化；然后向细胞工厂继续加入相同体积的消化液，孵育至所有细胞不再贴壁时，再向细胞工厂中加入相同体积的终止液终止消化；收集两次终止后的所有液体，离心除杂得到大规模培养好的表皮细胞。本发明一次培养可以获取大量状态一致性好，杂细胞含量非常少或无杂细胞，质量稳定的表皮细胞，节约培养时间，减少污染风险。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表皮 细胞 大规模 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种表皮细胞大规模培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，接种将表皮种子细胞与培养液混匀重悬后，均匀接种于细胞工厂中，保证每层接种细胞数量一致；步骤2，培养将接种好的表皮细胞放入CO2培养箱，在37℃、5% CO2浓度条件下进行培养，根据传代需求培养一段时间后收获细胞；步骤3，消化向细胞工厂加入消化液，CO2培养箱37℃孵育，待大部分细胞不再贴壁时，立即将工厂内液体转移到装有终止液的容器中终止消化；然后向细胞工厂继续加入相同体积的消化液，CO2培养箱37℃孵育至所有细胞不再贴壁时，再向细胞工厂中加入相同体积的的终止液终止消化；步骤4，离心收集两次终止后的所有液体，离心弃上清，用PBS平衡盐溶液重悬，再次离心弃上清，得到大规模培养好的表皮细胞。
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