[发明专利]一种表皮细胞大规模培养方法

权利要求书

1.一种表皮细胞大规模培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，接种

将表皮种子细胞与培养液混匀重悬后，均匀接种于细胞工厂中，保证每层接种细胞数量一致；

步骤2，培养

将接种好的表皮细胞放入CO₂培养箱，在37℃、5% CO₂浓度条件下进行培养，根据传代需求培养一段时间后收获细胞；

步骤3，消化

向细胞工厂加入消化液，CO₂培养箱37℃孵育，待大部分细胞不再贴壁时，立即将工厂内液体转移到装有终止液的容器中终止消化；然后向细胞工厂继续加入相同体积的消化液，CO₂培养箱37℃孵育至所有细胞不再贴壁时，再向细胞工厂中加入相同体积的的终止液终止消化；

步骤4，离心

收集两次终止后的所有液体，离心弃上清，用PBS平衡盐溶液重悬，再次离心弃上清，得到大规模培养好的表皮细胞。

2.根据权利要求1所述的表皮细胞大规模培养方法，其特征在于，步骤1所述接种的接种量为：按每细胞工厂0.25L～1.25L的加液量将细胞按1.6×10⁴/ml～4×10⁴/ml重悬后接种。

3.根据权利要求1所述的表皮细胞大规模培养方法，其特征在于，步骤2所述接种好的表皮细胞在CO₂培养箱中培养时，向细胞工厂中通入空气和CO₂，使细胞工厂内保持5% CO₂。

4.根据权利要求1所述的表皮细胞大规模培养方法，其特征在于，步骤3所述消化液为tryplE消化液，两次加入的消化液体积相等，两次加入的消化液总量为50~250ml。

5.根据权利要求1或4所述的表皮细胞大规模培养方法，其特征在于，步骤3所述终止液为无血清培养液，每次加入的终止液体积与每次加入的消化液体积相等。

6.根据权利要求1或4所述的表皮细胞大规模培养方法，其特征在于，步骤3所述离心为每分钟800~1000转离心6~10分钟。

7.根据权利要求1-4中任意一项所述的表皮细胞大规模培养方法，其特征在于，所述表皮细胞为人表皮细胞、小鼠表皮细胞、大鼠表皮细胞、猪表皮细胞或牛表皮细胞。