[发明专利]一种水生生物源交联胶原蛋白复合多层医用敷料

摘要

本发明公开了一种水生生物源高纯度高活性医用胶原蛋白，解决了天然胶原蛋白敷料的机械强度差、抗降解能力弱、伤口易受微生物感染的问题。采用酸提法结合胃蛋白酶去除端肽的方法提取胶原蛋白，通过超高压处理和组织捣碎的方法提高提取率，并通过脱细胞、除杂蛋白、脱脂、多次盐析、透析、除菌、脱色和除热源等一系列操作纯化，制备高纯度高活性医用胶原蛋白。通过真空冷冻干燥工艺制得孔隙均匀的网络状胶原蛋白海绵，再经物理交联和化学交联的方式对胶原蛋白海绵进行改性制备内层，然后与壳聚糖外层膜和医用无纺布基布层进行复合，最后经Co‑60灭菌后得到复合多层医用敷料成品。

主权项

一种改性胶原蛋白海绵，其特征在于，所述的改性胶原蛋白海绵的制备步骤如下：1)高纯度高活性医用胶原蛋白的制备：将鱼皮用刀片刮去鱼鳞、残肉和脂肪，洗净后切成小块；鱼皮经超高压处理后浸泡于0.5％–10％的Triton X‑100的磷酸缓冲液中，置于振荡器上震荡12–48h，60–200rpm，4℃，在蒸馏水中震荡漂洗，再将鱼皮浸泡于1％–5％的SDS磷酸缓冲液中，置于振荡器上震荡12–48h，60–200rpm，4℃，在蒸馏水中震荡漂洗脱除组织中的细胞；加入0.1M NaOH溶液浸泡除去非胶原成分及色素，蒸馏水反复洗至中性；加入正丁醇溶液搅拌去除脂肪，蒸馏水反复洗涤；使用组织捣碎机充分搅碎后，加入含胃蛋白酶的醋酸中进行提取，离心得上清液为胶原蛋白粗提液，再经的NaCl盐析，至溶液中NaCl最终浓度为0.9M，静置后，9,000rpm离心30min,收集沉淀溶于0.5M醋酸中，经二次盐析后的胶原蛋白复溶于0.5M醋酸中，溶液用0.02M的磷酸氢二钠溶液透析至pH≥8进行灭酶，再用蒸馏水透析除盐，直至透析外液用硝酸银溶液检测无氯离子即为透析终点；透析后的胶原蛋白溶液用0.22或0.45μm的板式膜进行除菌，最后用活性炭进行脱色，离心后去除活性炭获得胶原蛋白，低温真空冷冻干燥；2)内层多孔胶原蛋白海绵的制备：将步骤1)制备的胶原蛋白溶于0.1M–0.5M的醋酸溶液中，配制成质量百分比浓度为0.5％–1％的胶原蛋白溶液，采用真空脱泡和低温低速离心(3,000–5,000rpm,5–10min，4℃)并用的脱泡方式脱泡，再将处理的溶液零下40℃预冷冻24h–36h，零下38℃冷冻干燥24h–48h制成厚度为3mm的内层多孔胶原蛋白海绵；3)内层胶原蛋白海绵交联改性：将步骤2)所制备的内层多孔胶原蛋白海绵进行改性处理，得到改性的内层胶原蛋白海绵。