[发明专利]一种水生生物源交联胶原蛋白复合多层医用敷料

说明书

本发明公开了一种水生生物源高纯度高活性医用胶原蛋白，解决了天然胶原蛋白敷料的机械强度差、抗降解能力弱、伤口易受微生物感染的问题。采用酸提法结合胃蛋白酶去除端肽的方法提取胶原蛋白，通过超高压处理和组织捣碎的方法提高提取率，并通过脱细胞、除杂蛋白、脱脂、多次盐析、透析、除菌、脱色和除热源等一系列操作纯化，制备高纯度高活性医用胶原蛋白。通过真空冷冻干燥工艺制得孔隙均匀的网络状胶原蛋白海绵，再经物理交联和化学交联的方式对胶原蛋白海绵进行改性制备内层，然后与壳聚糖外层膜和医用无纺布基布层进行复合，最后经Co‑60灭菌后得到复合多层医用敷料成品。

技术领域

本发明属于医用材料技术领域，具体涉及一种水生生物源交联胶原蛋白复合多层医用敷料。

背景技术

胶原蛋白是一种来源广泛、低免疫原性、生物相容性好的天然可降解生物大分子，其具有优良的止血性能，对凝血功能障碍的患者也具有良好的止血作用，且能够促进肉芽组织的再生和修复，能促进创伤愈合。多年来的临床实践表明，传统的物理、化学、机械的止血方法均存在着一定的局限性和不良反应，而诸如胶原蛋白类的天然高分子物质医用敷料是一种有效的外科止血方式。胶原蛋白可以适用于各种实质性脏器、体表和骨组织、血管组织以及结缔组织的止血。美国IMS公司对伤口敷料类产品进行市场调查，可吸收止血剂占据了整个敷料类市场份额的75％，而胶原蛋白基生物医用敷料是可吸收止血剂的很大组成部分。从1983年胶原止血海绵问世以来，将胶原蛋白作为一种可降解的止血、愈创材料基质的研究已成为国内外的热点。

目前，用于生物医用材料的胶原蛋白主要来源于陆生动物，例如猪皮、牛跟腱和鼠尾，而由于口蹄疫、疯牛病等疾病的传播和宗教信仰的限制，从水生生物中寻找医用胶原蛋白作为替代来源则变得越来越重要。目前国内广泛应用的止血、愈创医用敷料质量参差不齐，都有各自的不足之处，国外的医用敷料因其高昂的价格限制了其广泛应用。至今仍然没有一种理想的水生生物源胶原蛋白基止血、愈创医用敷料能够同时解决胶原蛋白的应用瓶颈。

发明内容

本发明的目的在于提供一种水生生物源交联胶原蛋白复合多层医用敷料，从而解决天然胶原蛋白敷料机械强度差、抗降解能力弱、伤口易受微生物感染的问题。

本发明首先提供一种改性胶原蛋白海绵，其制备方法如下：

1)高纯度高活性医用胶原蛋白的制备：

将鱼皮用刀片刮去鱼鳞、残肉和脂肪，冷水洗净，用切片机切成0.5–1cm²的小块。鱼皮经超高压处理以提高胶原蛋白的提取率，压力为100–300MPa，处理时间为5–20min。将鱼皮浸泡于0.5％–10％的Triton X-100的磷酸缓冲液中，置于振荡器上震荡12–48h，60–200rpm，4℃，在蒸馏水中震荡漂洗，再将鱼皮浸泡于1％–5％的SDS磷酸缓冲液中，置于振荡器上震荡12–48h，60–200rpm，4℃，在蒸馏水中震荡漂洗，重复上述步骤3次以脱除组织中的细胞；加入0.1M NaOH溶液浸泡除去非胶原成分及色素，蒸馏水反复洗至中性；加入1 10％正丁醇溶液搅拌去除脂肪，蒸馏水反复洗涤。使用组织捣碎机充分搅碎后，加入含0.5％(w/w)胃蛋白酶的0.5M醋酸中进行提取48h，离心(9,000–15,000rpm,30min，4℃)，所得上清液为胶原蛋白粗提液，再经研细的NaCl盐析，至溶液中NaCl最终浓度为0.9M，静置一夜，9,000rpm离心30min,收集沉淀溶于0.5M醋酸中，经二次盐析后的胶原蛋白复溶于0.5M醋酸中，溶液对0.02M的磷酸氢二钠溶液透析至pH≥8进行灭酶，再对蒸馏水透析除盐，直至透析外液用硝酸银溶液检测无氯离子即为透析终点；透析后的胶原蛋白溶液用0.22或0.45μm的板式膜进行除菌，最后用活性炭进行脱色，离心后去除活性炭获得高纯度高活性的医用胶原蛋白，低温真空冷冻干燥；

2)内层多孔胶原蛋白海绵的制备：