[发明专利]黄曲霉毒素B1适配体亲和毛细管整体柱的制备及应用

摘要

本发明公开了一种黄曲霉毒素B1适配体亲和毛细管整体柱的制备及应用，将氨基修饰的黄曲霉毒素B1适配体通过戊二醛偶联接枝修饰于有机‑无机杂化的氨基毛细管整体柱，通过适配体与黄曲霉毒素B1特异性亲和作用，有机‑无机杂化整体柱高的柱渗透性和大的比表面积，可以高灵敏、高选择性地分离、富集复杂食品样品中痕量、超痕量黄曲霉毒素B1，与检测仪器联用可实现黄曲霉毒素B1简便、灵敏、快速检测。

主权项

1.一种黄曲霉毒素B1适配体亲和毛细管整体柱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）毛细管活化：分别用1.0mol/L氢氧化钠溶液冲洗毛细管4h，去离子水冲洗30min，1.0mol/L盐酸溶液冲洗4h，然后再以去离子水洗至中性，在160℃下用氮气吹干；（2）整体柱的原位合成：首先将10~30mg CTAB溶于150~350μL无水乙醇和50~150μL去离子水的混合溶液中；然后将100~200μL TEOS和50~100μL APTES快速加入上述混合溶液中，室温涡旋0.5~5min，然后放置在‑5~5℃的水浴中超声0.5~5min后，将混合溶液灌入上述活化处理过的毛细管中；最后，毛细管两端以硅橡胶封口，放置于30~60℃烘箱中反应10~30h；（3）整体柱的清洗：反应完成后，以甲醇和水充分清洗毛细管；（4）戊二醛衍生：将含有5~20%戊二醛的磷酸缓冲溶液以5~20μL/min速率通入毛细管整体柱中，连续反应12h，然后用磷酸缓冲溶液冲洗掉残留的戊二醛；（5）修饰适配体：取黄曲霉毒素B1适配体，其碱基序列为：5’‑AGCAGCACAGAGGTCAGATGGTGCTATCATGCGCTCAATGGGAGACTTTAGCTGCCCCCACCTATGCGTGCTACCGTGAA‑3’，其中5'端通过C6间隔臂被‑NH2修饰；将黄曲霉毒素B1适配体制成浓度为4~8nmol/L的磷酸缓冲溶液，注入毛细管整体柱中反应8~12h，重复三次，用磷酸缓冲溶液冲洗掉未反应的适配体；最后用3~8mg/ml氰基硼氢化钠冲洗整体柱6h，将制得的毛细管整体柱截取5 cm的长度用于之后的固相微萃取操作。