[发明专利]黄曲霉毒素B1适配体亲和毛细管整体柱的制备及应用

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素B1适配体亲和毛细管整体柱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）毛细管活化：分别用1.0mol/L氢氧化钠溶液冲洗毛细管4h，去离子水冲洗30min，1.0mol/L盐酸溶液冲洗4h，然后再以去离子水洗至中性，在160℃下用氮气吹干；

（2）整体柱的原位合成：首先将10~30mg CTAB溶于150~350μL无水乙醇和50~150μL去离子水的混合溶液中；然后将100~200μL TEOS和50~100μL APTES快速加入上述混合溶液中，室温涡旋0.5~5min，然后放置在-5~5℃的水浴中超声0.5~5min后，将混合溶液灌入上述活化处理过的毛细管中；最后，毛细管两端以硅橡胶封口，放置于30~60℃烘箱中反应10~30h；

（3）整体柱的清洗：反应完成后，以甲醇和水充分清洗毛细管；

（4）戊二醛衍生：将含有5~20%戊二醛的磷酸缓冲溶液以5~20μL/min速率通入毛细管整体柱中，连续反应12h，然后用磷酸缓冲溶液冲洗掉残留的戊二醛；

（5）修饰适配体：取黄曲霉毒素B1适配体，其碱基序列为：

5’-AGCAGCACAGAGGTCAGATGGTGCTATCATGCGCTCAATGGGAGACTTTAGCTG

CCCCCACCTATGCGTGCTACCGTGAA-3’，其中5'端通过C6间隔臂被-NH₂修饰；将黄曲霉毒素B1适配体制成浓度为4~8nmol/L的磷酸缓冲溶液，注入毛细管整体柱中反应8~12h，重复三次，用磷酸缓冲溶液冲洗掉未反应的适配体；最后用3~8mg/ml氰基硼氢化钠冲洗整体柱6h，将制得的毛细管整体柱截取5 cm的长度用于之后的固相微萃取操作。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，用于制备整体柱的石英毛细管内径为530μm，外径为690μm。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，将25mg CTAB溶于225μL无水乙醇和100μL去离子水的混合溶液中，然后将150μL TEOS和80μL APTES快速加入上述混合溶液中。

4.一种权利要求1-3任一项所述方法制备得到的毛细管整体柱。

5.一种权利要求4所述毛细管整体柱在分离富集黄曲霉毒素B1中的应用。

6.根据权利要求5所述的毛细管整体柱在分离富集黄曲霉毒素B1中的应用，其特征在于，步骤如下：

（1）毛细管活化：用10~20 mmol/L Tris-HCl缓冲溶液平衡亲和毛细管整体柱，将亲和毛细管整体柱活化；

（2）上样：将待测样品溶液以10~100μL/min通入亲和毛细管整体柱内；

（3）清洗：待样品全部流经亲和毛细管整体柱后，用10~20 mmol/L Tris-HCl缓冲液将柱内残留和未被特异性捕获的黄曲霉毒素B1淋洗下来；

（4）洗脱：用含有40~60%甲醇的Tris-HCl 缓冲溶液将被亲和毛细管整体柱捕获的黄曲霉毒素B1洗脱。