[发明专利]一种血浆或血清的IgG糖型检测批量前处理方法

摘要

本发明公开了一种血浆或血清IgG糖型检测的批量前处理方法，其步骤包括血浆或血清IgG提取、IgG切糖、糖链标记、标记后纯化得到被标记糖链，整板挥干。本发明与传统的单个糖蛋白(IgG)样品进行IgG切糖‑糖链纯化‑2‑AB标记糖链‑标记后糖链纯化步骤相比，本发明在2‑AB前省去了糖链的纯化步骤，大大缩减了样品前处理时间，还节约了成本，采用整板操作减少了样品转移的损失及繁冗步骤，能同时快速高效地处理96份血浆(或血清)样品。

主权项

一种从血浆或血清的IgG上批处理切除糖链和纯化的方法，步骤包括：(1)IgG提取：通过96孔Protein G提取板将血浆或血清IgG提取至2mL96孔收集板中，测定蛋白浓度后，取出250‐350μL IgG溶液于1.1mL 96孔深孔板中整板挥干；(2)IgG切糖：在深孔板中加入变性剂变性蛋白后调节溶液pH至8.0，加入糖苷酶或切糖酶进行切除糖链；(3)糖链标记：在挥干的深孔板中加入2‐AB标记溶液，65℃反应3小时，进行2‐AB标记；(4)标记后纯化：深孔板加入乙腈溶液，上清液转移至96孔糖链纯化板，除去多余的标记试剂，在深孔板中收集洗脱出的被标记糖链，整板挥干；其中，步骤(2)中变性剂为SDS溶液，并在60℃变性反应10min，或变性剂为Igepal溶液，并在室温变性反应10分钟；以及加入的糖苷酶或切糖酶的质量与蛋白的质量比为1:50～1:30；步骤(3)中，每孔加入的标记溶液为0.5mg的2‐AB和1.2mg的氰基硼氢化钠，并且所述2‐AB和氰基硼氢化钠预先配制在含30％乙酸的DMSO溶液中；步骤(4)中，去除多余标记试剂所用清洗液为96％的乙腈溶液，洗脱标记的糖链为超纯水。