[发明专利]一种球囊霉素的提纯方法

摘要

本发明提供了一种土壤中球囊霉素的提纯方法，步骤包括将筛去杂质的土壤通过不同浓度柠檬酸钠溶液处理，提取离心分离多次分别得液态的易提取球囊霉素、难提取球囊霉素、总提取球囊霉素，进一步处理得到固态易提取球囊霉素、难提取球囊霉素、总提取球囊霉素。该方法原料易得，预处理要求简单，对环境无污染，能去除球囊霉素以外的所有非热稳态土壤蛋白，得到高纯度的球囊霉素，而且方便对其具体组成、基团分布、空间构型、结构特征的研究，方法安全可靠，具有实际的科研和应用价值。

主权项

一种球囊霉素的提纯方法，其特征在于：步骤包括：S1、采集土壤表面0‑20cm的黄壤，混匀风干，过孔径4mm的网筛去除土壤中杂质；S2、取步骤S1所得土壤，加入20mmol/L，pH为7的柠檬酸钠溶液，振荡30～60s，后于100‑105kpa，120‑125℃条件下提取25‑35min，再在10000～12000g/s下离心5～10min，分别收集上清液及沉淀；S3、将步骤S2所得上清液于100‑105kpa，120‑125℃条件下提取25‑35min，再在10000～12000g/s下离心5～10min，收集上清液，重复提取、离心、收集上清液的过程多次至上清液的颜色不再是红棕色，即得液态的易提取球囊霉素；S4、取步骤S2所得沉淀，加入50mmol/L，pH为8的柠檬酸钠溶液，振荡至沉淀均匀散开，再于100‑105kpa，120‑125℃条件下提取55‑65min，再在10000～12000g/s下离心5～10min，收集上清液，重复提取、离心、收集上清液的过程多次至上清液的颜色不再是红棕色，即得液态的难提取球囊霉素；S5、取步骤S1所得土壤，加入50mmol/L，pH为8的柠檬酸钠溶液，振荡30～60s，后于100‑105kpa，120‑125℃条件下提取25‑35min，再在10000～12000g/s下离心5～10min，收集上清液，重复提取、离心、收集上清液的过程多次至上清液的颜色不再是红棕色，即得液态的总提取球囊霉素；S6、分别将步骤S3所得液态的易提取球囊霉素、步骤S4所得液态的难提取球囊霉素、步骤S5所得液态的总提取球囊霉素的pH调节至2.5后，在4℃，4000～8000g/s下离心15～20min，弃去上清液收集下层沉淀；溶解沉淀后装入透析袋，置于去离子水下透析，收集提取液，提取液在冷冻干燥机上冷冻干燥12～24h，得到固态的纯化易提取球囊霉素、难提取球囊霉素和总提取球囊霉素。