[发明专利]一种球囊霉素的提纯方法

权利要求书

1.一种球囊霉素的提纯方法，其特征在于：步骤包括：

S1、采集土壤表面0-20cm的黄壤，混匀风干，过孔径4mm的网筛去除土壤中杂质；

S2、取步骤S1所得土壤，加入20mmol/L，pH为7的柠檬酸钠溶液，振荡30～60s，后于100-105kpa，120-125℃条件下提取25-35min，再在10000～12000g/s下离心5～10min，分别收集上清液及沉淀；

S3、将步骤S2所得上清液于100-105kpa，120-125℃条件下提取25-35min，再在10000～12000g/s下离心5～10min，收集上清液，重复提取、离心、收集上清液的过程多次至上清液的颜色不再是红棕色，即得液态的易提取球囊霉素；

S4、取步骤S2所得沉淀，加入50mmol/L，pH为8的柠檬酸钠溶液，振荡至沉淀均匀散开，再于100-105kpa，120-125℃条件下提取55-65min，再在10000～12000g/s下离心5～10min，收集上清液，重复提取、离心、收集上清液的过程多次至上清液的颜色不再是红棕色，即得液态的难提取球囊霉素；

S5、取步骤S1所得土壤，加入50mmol/L，pH为8的柠檬酸钠溶液，振荡30～60s，后于100-105kpa，120-125℃条件下提取25-35min，再在10000～12000g/s下离心5～10min，收集上清液，重复提取、离心、收集上清液的过程多次至上清液的颜色不再是红棕色，即得液态的总提取球囊霉素；

S6、分别将步骤S3所得液态的易提取球囊霉素、步骤S4所得液态的难提取球囊霉素、步骤S5所得液态的总提取球囊霉素的pH调节至2.5后，在4℃，4000～8000g/s下离心15～20min，弃去上清液收集下层沉淀；溶解沉淀后装入透析袋，置于去离子水下透析，收集提取液，提取液在冷冻干燥机上冷冻干燥12～24h，得到固态的纯化易提取球囊霉素、难提取球囊霉素和总提取球囊霉素。

2.根据权利要求1所述的球囊霉素的提纯方法，其特征在于：步骤S2所述柠檬酸钠溶液配制方法包括如下步骤：

a、配制A液：取0.42～4.2g C₆H₈O₇·H₂O溶于100～1000mL蒸馏水中配制得0.02mol/L柠檬酸溶液；

b、配制B液：取0.5365～5.365g Na₂HPO₄·7H₂O或0.716～7.16g_{Na2HPO4·12H2O在蒸馏水中溶至100～1000mL配制得0.02mol/L磷酸氢二钠溶液；}

c、把A液和B液以13:87的比例充分混匀得20mmol/L、pH＝7.0的柠檬酸钠缓冲液。

3.根据权利要求1所述的球囊霉素的提纯方法，其特征在于：步骤S4所述柠檬酸钠溶液配制方法包括如下步骤：称取1.4705～14.705g柠檬酸钠定溶至100～1000ml蒸馏水中使柠檬酸钠溶液浓度为50mmol/L，定容过程采用1～4moL氢氧化钠溶液调整pH为8.0。

4.根据权利要求1所述的球囊霉素的提纯方法，其特征在于：步骤S2所述土壤取量为1.0～5.0g，柠檬酸钠溶液用量为4～40mL，步骤S4所述柠檬酸钠溶液用量为8～40mL。

5.权利要求1所述的球囊霉素的提纯方法，其特征在于：步骤S5所述土壤取量为1.0～5.0g，柠檬酸钠溶液用量为4～40mL。

6.根据权利要求1所述的球囊霉素的提纯方法，其特征在于：步骤S6所述冷冻干燥步骤前进行预冻，所述预冻温度为-40℃，预冻时间为2h。

7.根据权利要求6所述的球囊霉素的提纯方法，其特征在于：步骤S6所述冷冻干燥为隔板温度-60℃～-55℃，冷凝器温度-65℃～-60℃，极限真空度0.8～1mbar的条件下冷冻干燥处理20～24h。

8.根据权利要求1所述的球囊霉素的提纯方法，其特征在于：步骤S1所述土壤为橘园土壤。