[发明专利]一种基因合成方法在审
| 申请号： | 201710250310.2 | 申请日： | 2017-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN107190001A | 公开（公告）日： | 2017-09-22 |
| 发明（设计）人： | 沈鹤霄;华权高;杨明波 | 申请（专利权）人： | 武汉金开瑞生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/70 |
| 代理公司： | 北京众达德权知识产权代理有限公司11570 | 代理人： | 王俊杰 |
| 地址： | 430206 湖北省武汉市东湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种基因合成方法，所述方法包括(1)将待合成基因序列分成55‑100bp长度的第一连续片段，将所述第一连续片段设计成正向引物；将与所述第一连续片段错开15‑20bp长度处的基因序列作为第二连续片段，在所述第二连续片段的反向互补序列上设计连续的反向引物；(2)将所述正向引物和反向引物混合，得到引物混合物；(3)将所述引物混合物煮沸，退火，加入T4DNA连接酶，将引物连成两端带长粘性末端的双链DNA基因；(4)将合成的双链DNA基因连接到pUC57‑GFP‑Amp载体上，所述pUC57‑GFP‑Amp载体的序列如序列表1所示，转化大肠杆菌细胞，反向筛选不发荧光的菌落，测序验证。本发明不依赖PCR扩增，规避了PCR扩增中繁琐的实验步骤和PCR技术错误率高等缺陷。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基因 合成 方法 | ||
【主权项】：
一种基因合成方法，其特征在于：所述方法包括：(1)将待合成基因序列分成55‑100bp长度的第一连续片段，将所述第一连续片段设计成正向引物；将与所述第一连续片段错开15‑20bp长度处的基因序列作为第二连续片段，在所述第二连续片段的反向互补序列上设计连续的反向引物；(2)将所述正向引物和反向引物混合，得到引物混合物；(3)将所述引物混合物煮沸，退火，得到含有多个缺刻的双链DNA片段；(4)将合成的双链DNA片段连接到pUC57‑GFP‑Amp载体上，所述载体的序列如序列表1所示，转化大肠杆菌细胞，反向筛选不发荧光的菌落，测序验证。
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