[发明专利]一种高温诱导中国大鲵雄性化的方法

摘要

本发明公开了一种高温诱导大鲵雄性化的方法，其步骤：A、中国大鲵性腺分化起始时间确定：利用组织切片结合显微镜观察，对中国大鲵不同发育时期性腺进行组织学观察；B、中国大鲵高温致死温度的确定：对出膜后仔鲵进行不同温度持续处理；C、鉴定中国大鲵不同温度下的表型性比：高温处理性别分化前仔鲵至性别分化完成后常温养殖至1年至1.5年龄时采集处理后鱼苗性腺，进行组织学鉴定表型性别；D、性别相关基因对高温处理卵巢表达分析鉴定。方法易行，操作简便，弄清了高温诱导大鲵雄性化的温度，解决了目前生产上雄性大鲵多数少精或是精子质量较差导致有效参繁雄性亲本缺乏以及为后续大鲵性别控制和全雄育种提供一种技术手段。

主权项

1.一种高温诱导大鲵雄性化的方法，其步骤是：A、中国大鲵性腺分化起始时间的确定：利用组织切片结合显微镜观察，对中国大鲵不同发育时期性腺进行组织学观察；在18－22℃饲养条件下，出膜88－98天发现性腺开始分化，出膜200－212天雌雄性腺分化完成，确定了中国大鲵温度诱导起始时间为出膜后50－90天；B、中国大鲵高温致死温度的确定：出膜后50－240天对中国大鲵进行不同温度：20℃、24℃、28℃、30℃、32℃持续处理178－182天，不同温度计算存活率与死亡率，结果显示，高温30℃、32℃死亡率为100%，对照组20℃死亡率在7.5%‑10%, 24℃死亡率15%‑20%，28℃组死亡率35%‑42.5%，结果表明，30℃为大鲵的致死温度；C、鉴定中国大鲵不同温度表型性比：20℃、24℃、28℃下的表型性比：高温处理性别分化前仔鲵至性别分化完成后常温养殖至1至1.5年龄时采集处理后鱼苗性腺，进行组织学鉴定表型性别，结果显示，28℃导致大鲵雄性率高达63.6%‑70.5%，20℃与24℃时雌雄大鲵性比未显著性偏离1:1；D、性别相关基因在不同温处理卵巢表达模式分析：利用大鲵性别标志基因Ftz‑f1与Foxl2进行不同温度：20℃、24℃、28℃处理下卵巢相对定量表达分析，结果显示：Ftz‑f1基因在温度24℃与28℃时，卵巢中表达量高于20℃；Foxl2基因表达量在28℃时下调。