[发明专利]一种高温诱导中国大鲵雄性化的方法

权利要求书

1.一种高温诱导中国大鲵雄性化的方法，其步骤是：

A、中国大鲵性腺分化起始时间的确定：利用组织切片结合显微镜观察，对中国大鲵不同发育时期性腺进行组织学观察；在18－22℃饲养条件下，出膜88－98天发现性腺开始分化，出膜200－212天雌雄性腺分化完成，确定了中国大鲵温度诱导起始时间为出膜后50－90天；

B、中国大鲵高温致死温度的确定：出膜后50－240天对中国大鲵进行不同温度：20℃、24℃、28℃、30℃、32℃持续处理178－182天，不同温度计算存活率与死亡率，结果显示，高温30℃、32℃死亡率为100%，对照组20℃死亡率在7.5%-10%, 24℃死亡率15%-20%，28℃组死亡率35%-42.5%，结果表明，30℃为大鲵的致死温度；

C、鉴定中国大鲵不同温度表型性比：20℃、24℃、28℃下的表型性比：高温处理性别分化前仔鲵至性别分化完成后常温养殖至1至1.5年龄时采集处理后鱼苗性腺，进行组织学鉴定表型性别，结果显示，28℃导致大鲵雄性率高达63.6%-70.5%，20℃与24℃时雌雄大鲵性比未显著性偏离1:1；

D、性别相关基因在不同温度处理卵巢表达模式分析：利用大鲵性别标志基因Ftz-f1与Foxl2进行不同温度：20℃、24℃、28℃处理下卵巢相对定量表达分析，结果显示：Ftz-f1基因在温度24℃与28℃时，卵巢中表达量高于20℃；Foxl2基因表达量在28℃时下调。