[发明专利]激素受体阳性乳腺癌复发监测基因突变文库的构建方法

摘要

本发明公开了一种激素受体阳性乳腺癌复发监测基因突变文库的构建方法，其特征在于：覆盖人类基因KRAS、JAK3、AKT1、CREBBP、PTEN、RB1、TP53、CTNNB1、TSC2、TSC1、ERBB2、PIK3CA、SF3B1、JAK2、CDH1、SMAD4、GATA3、MAP2K4、MAP3K1和ESR1上的总共1357种体细胞突变。本发明的构建方法针对多个靶序列进行单管，快速完成文库的构建，整个文库构建过程仅需要2～3小时，手动时间仅仅需要45分钟即可，可以十分有效的解决目前对于临床上乳腺癌复发监测中在少量的外周血样本基础上需要对体细胞多基因、多靶点检测这一难点，且成本低廉。

主权项

激素受体阳性乳腺癌复发监测基因突变文库的构建方法，其特征在于，覆盖人类基因KRAS、JAK3、AKT1、CREBBP、PTEN、RB1、TP53、CTNNB1、TSC2、TSC1、ERBB2、PIK3CA、SF3B1、JAK2、CDH1、SMAD4、GATA3、MAP2K4、MAP3K1和ESR1上的总共1357种体细胞突变，具体包括如下步骤：(1)针对目的基因KRAS、JAK3、AKT1、CREBBP、PTEN、RB1、TP53、CTNNB1、TSC2、TSC1、ERBB2、PIK3CA、SF3B1、JAK2、CDH1、SMAD4、GATA3、MAP2K4、MAP3K1和ESR1设计基本扩增引物组，该基本扩增引物组的正向引物和反向引物的5’端设有额外的2～5个T，且该2～5个T的靠近3’端的第一个T具有PNA修饰，同时该基本扩增引物组的Tm值相差不超过1℃；(2)将模板、上述基本扩增引物组置于一含有RingCap‑Taq酶的PCR反应体系中进行扩增，纯化后得扩增产物；将扩增产物、多对第一不对称连接探针、通用引物和上述RingCap‑Taq酶混合进行PCR，纯化后获得文库产物；(3)将文库产物组成所述用于高通量测序的肿瘤基因变异文库；上述RingCap‑Taq酶由Taq酶、DNA连接酶和DNA末端修饰酶组成。