[发明专利]microRNA重编程体细胞为神经干细胞的制备方法及应用

摘要

本发明提供了一种诱导体细胞转分化为神经干细胞的方法及其应用。具体地，本发明涉及采用microRNA‑302、丙戊酸、polybrene、表皮生长因子和成纤维细胞生长因子等组合，在正常生理环境下诱导人成纤维细胞、上皮细胞、血细胞、脂肪细胞等体细胞通过重编程技术诱导形成具有高产同时又具有良好多能性以及传代稳定性的神经干细胞。本发明方法采用单个microRNA转染体细胞，无需引入外源转录因子，制备形成克隆时间远远短于现有技术，有望开发成为治疗退行性神经系统疾病(包括脊髓损伤等病变)的治疗方法或药物，因此具有良好的临床应用前景。

主权项

一种制备神经干细胞的方法，包括a）哺乳动物的体细胞来源，包括且不限于成纤维细胞、上皮细胞、血细胞和脂肪细胞等；和b）通过导入的外源的microRNA组合物将成纤维细胞等体细胞重编程为神经干细胞，其中所述组合物指mir‑302、丙戊酸（VPA）、polybrene和维生素C（VC）；和c） 一种用于将成纤维细胞转分化为神经干细胞的培养基，其中所述培养基含有 含有VPA、Polybrene和VC，VPA的浓度为0‑10 mMol/L，优选浓度为0.5mMol/L；polybrene的浓度为0‑100ug/ml ，优选浓度为8ug/ml；VC的浓度为0‑200ng/ml,优选浓度为20ng/ml；和d）用生长因子促进细胞增殖，其中所述生长因子选自表皮生长因子（EGF）和成纤维细胞生长因子（FGF）；和根据权利1所述的方法，还包括e）在适于增殖的条件下，在玻璃基片上用含有细胞生长因子的培养液进行诱导培养，获得重编程的神经干细胞。