[发明专利]microRNA重编程体细胞为神经干细胞的制备方法及应用

权利要求书

1.一种制备神经干细胞的方法，包括如下步骤：

将外源mir-302的cDNA序列克隆到慢病毒载体上，得到重组载体，再将重组载体进行测序，测序无误的克隆进行质粒抽提，然后将重组载体转入293T细胞进行病毒包装，并利用超滤或超速离心进行病毒浓缩，感染293T细胞，利用倍比稀释法进行病毒滴度测试；每20000个人成体包皮成纤维细胞，加入病毒液4微升，同时加入6微升polybrene，使polybrene终浓度为6μg/ml，同时添加VPA 10微升，使VPA的终浓度为0.5mMol/L，感染72小时，中间第24小时后加入VC 50ng/ml，中间第48小时后，补加神经干细胞诱导液500微升，所述诱导液中添加有20 ng/ml bFGF和10 ng/ml EGF，感染结束后撤去含有病毒的培养液，转入低粘附板培养，每两天换液，2-3周内获得神经干细胞。

2.一种制备神经干细胞的方法，包括如下步骤：

将外源mir-302的cDNA序列克隆到慢病毒载体上，得到重组载体，再将重组载体进行测序，测序无误的克隆进行质粒抽提，然后将重组载体转入293T细胞进行病毒包装，并利用超滤或超速离心进行病毒浓缩，感染293T细胞，利用倍比稀释法进行病毒滴度测试；每10000个鼠胚胎成纤维细胞，加入病毒液4微升，同时加入6微升polybrene，使polybrene的终浓度为6μg/ml，同时添加VPA 10微升，使VPA的终浓度为0.5mMol/L，感染72小时，中间第24小时后加入VC 50 ng/ml，中间第48小时后，补加神经干细胞诱导液500微升，所述诱导液中添加有20 ng/ml bFGF和10 ng/ml EGF，感染结束后撤去含有病毒的培养液，转入低粘附板培养，每两天换液，2-3周内获得神经干细胞。

3.一种神经干细胞，其特征在于所述的神经干细胞是由权利要求1或2所述的方法制备的。

4.权利要求3所述神经干细胞的用途，其特征在于用于制备预防或治疗神经系统疾病的药物组合物。