[发明专利]一种检测人类CYP2C19基因多态性的方法及试剂盒

摘要

本发明提供一种新的检测人类CYP2C19基因多态性的方法，包括如下步骤(1)设计ARMS引物，所述ARMS引物的3’末端为突变位点，并将位于突变位点上游第1‑3位核苷酸中的任一位错义突变；(2)所述针对每个SNP设计等位基因ARMS引物后，分别在两个特异性的ARMS引物的5’端引入一段与人类基因序列无同源的人工核苷酸序列；(3)根据所述引入的通用人工序列，设计一条与通用序列中间片段序列完全互补配对的Taqman探针，特异性识别ARMS引物扩增的特异性片段；本发明的检测方法及试剂盒能够大大增加等位基因特异性引物区分不同等位基因的能力；保证检测结果准确性的同时大大节省了成本，提高了效率。

主权项

一种检测人类CYP2C19基因多态性的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)根据CYP2C19基因目的SNP位点，对应等位基因，分别设计ARMS引物，所述ARMS引物的3’末端为突变位点，并将位于突变位点上游第1‑3位核苷酸中的任一位错义突变；(2)所述针对每个SNP设计等位基因ARMS引物后，分别在两个特异性的ARMS引物的5’端引入一段与人类基因序列无同源的人工核苷酸序列，形成含有一段通用序列标签的SNP位点特异性ARMS引物序列；针对一个SNP位点的两个等位基因特异性ARMS引物，5’端引入的序列标签是不同的，特异性的；(3)根据所述引入的通用人工序列，设计一条与通用序列中间片段序列完全互补配对的Taqman探针，特异性识别ARMS引物扩增的特异性片段；所述Taqman探针，对应不同等位基因位点的特异性片段，分别被标记了不同的荧光发光基团，如一条Taqman探针5’端被标记FAM基团，3’端标记对应猝灭基团BHQ1，则另一条探针则5’端被标记HEX基团，3’端被探针对应猝灭基团BHQ1；(4)提取样本DNA，利用步骤2中设计的引物对和步骤3中设计的探针进行荧光定量PCR扩增，根据荧光信号判定检测位点基因型。