[发明专利]一种检测人类CYP2C19基因多态性的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测人类CYP2C19基因多态性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)根据CYP2C19基因目的SNP位点，对应等位基因，分别设计ARMS引物，所述ARMS引物的3’末端为突变位点，并将位于突变位点上游第1-3位核苷酸中的任一位错义突变；

(2)所述针对每个SNP设计等位基因ARMS引物后，分别在两个特异性的ARMS引物的5’端引入一段与人类基因序列无同源的人工核苷酸序列，形成含有一段通用序列标签的SNP位点特异性ARMS引物序列；针对一个SNP位点的两个等位基因特异性ARMS引物，5’端引入的序列标签是不同的，特异性的；

(3)根据所述引入的通用人工序列，设计一条与通用序列中间片段序列完全互补配对的Taqman探针，特异性识别ARMS引物扩增的特异性片段；所述Taqman探针，对应不同等位基因位点的特异性片段，分别被标记了不同的荧光发光基团，如一条Taqman探针5’端被标记FAM基团，3’端标记对应猝灭基团BHQ1，则另一条探针则5’端被标记HEX基团，3’端被探针对应猝灭基团BHQ1；

(4)提取样本DNA，利用步骤2中设计的引物对和步骤3中设计的探针进行荧光定量PCR扩增，根据荧光信号判定检测位点基因型。

2.根据权利要求1所述的检测人类CYP2C19基因多态性的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，针对CYP2C19基因C.681位点GG等位基因型设计的ARMS引物引入通用序列后形成的通用-特异嵌合引物的序列如SEQNO.1所示；针对CYP2C19基因C.681位点AA等位基因型设计的ARMS引物引入通用序列后形成的通用-特异嵌合引物的序列如SEQ NO.2所示；针对CYP2C19基因C.636位点GG等位基因型设计的ARMS引物引入通用序列后的序列如SEQ NO.3所示；针对CYP2C19基因C.636位点AA等位基因型设计的ARMS引物引入通用序列后的序列如SEQ NO.4所示；C.681位点野生型扩增ARMS引物SEQ NO.1和，C.636位点野生型扩增ARMS引物SEQ NO.3，所引物的通用序列是完全一样的，序列如SEQ NO.5所示；C.681位点突变型扩增ARMS引物SEQ NO.2和，C.636位点突变型扩增ARMS引物SEQ NO.4，所引物的通用序列是完全一样的，序列如SEQ NO.6所示。

3.根据权利要求1所述的检测人类CYP2C19基因多态性的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，特异性识别C.681位点GG等位基因型扩增片段的Taqman探针序列和特异性识别C.636位点GG等位基因型扩增片段的Taqman探针序列完全一致，都如SEQ NO.7所示；特异性识别C.681位点AA等位基因型扩增片段的Taqman探针序列和特异性识别C.636位点AA等位基因型扩增片段的Taqman探针序列完全一致如SEQ NO.8所示。

4.根据权利要求1所述的检测人类CYP2C19基因多态性的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述两条特异性探针，属于和通用序列中间片段完全互补配对的通用检测探针，适用于其他任何想利用此方法的SNP位点的检测，探针为普通Taqman探针。