[发明专利]细胞中次氯酸原位快速检测方法

摘要

本发明细胞中次氯酸原位快速检测方法，含有以下步骤：⑴合成次氯酸识别分子；⑵制备高浓度表面增强拉曼光谱活性基底；⑶制备纳米探针；⑷建立特征峰强度‑浓度标准曲线图；⑸获得细胞中次氯酸的表面增强拉曼光谱图；⑹对照和检测。本发明提供了一种利用表面增强拉曼光谱技术对细胞中次氯酸原位快速检测的新的方法，它具有检测和分析速度快、灵敏度高、样品用量少、定性能力强、抗光漂白、水干扰小等优点，可对细胞中的次氯酸进行原位快速定性和定量检测，检测灵敏度可达1μM以下。

主权项

一种细胞中次氯酸原位快速检测方法，其特征在于，含有以下步骤：（1）合成次氯酸识别分子将反应物与强碱溶液按一定的当量比混合在一起；将所述混合溶液在氮气保护下搅拌6～7小时，然后加入2～3M酸溶液，用酯类物质提取产物后洗涤，在真空中富集产物，获得次氯酸识别分子；（2）制备高浓度表面增强拉曼光谱活性基底取质量比为1～2%的氯金酸溶液4.5～4.8mL，将其加入到90～100mL的超纯水中的纯水中，加热至95～100℃，逐滴加入质量比为0.1～0.2%的柠檬酸钠溶液，持续煮沸并搅拌20分钟后冷却至室温，得到稳定的红色表面增强拉曼光谱活性基底——金胶；将所述金胶放入离心管内高速离心5～10 分钟，取下层高浓度金胶胶体以备用；（3）制备纳米探针取浓度为10‑3～10‑4 M的次氯酸识别分子溶液，将其与步骤（2）获得的高浓度金胶胶体混合均匀，静置10～20分钟；然后将其放入离心管内高速离心5～10 分钟，取出上清液后将底部高浓度混合物重新分散，获得纳米探针；（4）建立特征峰强度‑浓度标准曲线图将步骤（3）获得的纳米探针用便携式拉曼光谱仪对次氯酸钠溶液进行表面增强拉曼光谱检测，获得其用于定性分析的表面增强拉曼光谱指纹图谱，建立特征峰强度‑浓度标准曲线图，可用于定量分析；（5）获得细胞中次氯酸的表面增强拉曼光谱图取适量步骤（3）获得的纳米探针加入到细胞培养液中，使所述纳米探针孵化到样品细胞内；用便携式拉曼光谱仪对细胞中次氯酸进行表面增强拉曼光谱检测以获得该样品细胞中次氯酸的表面增强拉曼光谱图；（6）对照和检测将步骤（5）检测得到的表面增强拉曼光谱图与步骤（4）获得的表面增强拉曼光谱指纹图谱以及特征峰强度‑浓度标准曲线图进行比较，定性和定量分析步骤（5）检测的细胞中的次氯酸。