[发明专利]细胞中次氯酸原位快速检测方法

说明书

本发明细胞中次氯酸原位快速检测方法，含有以下步骤：⑴合成次氯酸识别分子；⑵制备高浓度表面增强拉曼光谱活性基底；⑶制备纳米探针；⑷建立特征峰强度‑浓度标准曲线图；⑸获得细胞中次氯酸的表面增强拉曼光谱图；⑹对照和检测。本发明提供了一种利用表面增强拉曼光谱技术对细胞中次氯酸原位快速检测的新的方法，它具有检测和分析速度快、灵敏度高、样品用量少、定性能力强、抗光漂白、水干扰小等优点，可对细胞中的次氯酸进行原位快速定性和定量检测，检测灵敏度可达1μM以下。

技术领域

本发明涉及生物分析技术或是化学分析技术领域，是利用表面增强拉曼光谱效应对细胞进行原位快速检测的技术，具体地说，是对细胞中次氯酸进行原位快速检测的一种方法。

背景技术

活性氧物种在生物体内发挥着十分关键的生物学效应，可引起DNA损伤、影响信号传导、调节蛋白活性等等。有研究表明：次氯酸与心血管疾病、炎症、癌症、糖尿病、神经系统病变等诸多生理或病理过程密切相关。但是，由于缺乏强有力的分析检测手段，对次氯酸的很多生物学功能还不十分清楚。因此，灵敏而精准的对细胞内次氯酸进行原位检测的技术对信号传导过程分析、病理生理机制阐释以及新型药物筛选等诸多领域均具有重要的应用价值。

目前，用于检测细胞内次氯酸的方法主要有比色分析、色谱分析、电化学分析、荧光分析等。这些方法在一定程度上为次氯酸的检测分析提供了技术支持，但是，它们仍然无法很好地满足对细胞内次氯酸进行原位检测的需求。其中，比色分析较为简便、技术要求低，但其灵敏度也较低且难以实现细胞内次氯酸的检测分析；色谱分析虽具有较好的定性能力和灵敏度，但仍然难以实现对细胞的原位分析；电化学分析虽具有很高的灵敏度，但其定性分析能力较弱，且对细胞的原位分析也存在一定困难。比较而言，荧光分析倒能够在一定程度上克服上述分析方法的不足，可进行细胞的原位分析，但是，荧光分析会受到光漂白、光毒性的影响并且光谱谱带较宽而不易进行原位监测。

表面增强拉曼光谱技术是一种能从分子水平上获得物质结构及化学组成信息的高灵敏表面分析技术，可提供指纹识别谱图，具有检测速度快、不受水干扰、灵敏度高、定性能力强、适合多组份分析、抗光漂白、细胞自身荧光干扰小等优点；其在物理化学、分析化学、生命科学、环境科学、纳米材料等许多方面的应用研究引起了本领域专家学者的浓厚兴趣，并在生物物理、生物化学以及生物医学等研究领域展现了巨大的应用潜力。

细胞中的次氯酸因其拉曼活性小或者靶向作用弱难以获取特征表面增强拉曼光谱信号，相关的表面增强拉曼光谱检测研究较为少见。然而，如能突破这方面的技术瓶颈，研究建立基于表面增强拉曼光谱的细胞内次氯酸的原位检测技术，将有助于充分发挥表面增强拉曼光谱的技术优势、克服现有检测方法的技术不足，提升细胞内次氯酸的研究水平。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种细胞中次氯酸原位快速检测方法，它是利用表面增强拉曼光谱技术对细胞中的次氯酸进行原位快速的检测，具有检测和分析速度快、灵敏度高、样品用量少、定性能力强、抗光漂白、水干扰小等优点，可对细胞中的次氯酸进行原位快速定性和定量检测，检测灵敏度可达1μM以下。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案。

一种细胞中次氯酸原位快速检测方法，其特征在于，含有以下步骤：

（1）合成次氯酸识别分子

将反应物与强碱溶液按一定的当量比混合在一起；

将所述混合溶液在氮气保护下搅拌6～7小时，然后加入2～3M酸溶液，用酯类物质提取产物后洗涤，在真空中富集产物，获得次氯酸识别分子；

（2）制备高浓度表面增强拉曼光谱活性基底