[发明专利]细胞中次氯酸原位快速检测方法

权利要求书

1.一种细胞中次氯酸原位快速检测方法，其特征在于，含有以下步骤：

(1)合成次氯酸识别分子

将5-甲氧基-2-氧代-1,3-苯并氧硫杂环戊烯与强碱溶液按一定的当量比混合在一起；

将所述混合溶液在氮气保护下搅拌6～7小时，然后加入2～3M酸溶液，用乙酸乙酯提取产物后洗涤，在真空中富集产物，获得次氯酸识别分子；其中，所述次氯酸识别分子为能与次氯酸发生特异性反应的分子2-巯基-4-甲氧基苯酚，所述强碱溶液为氢氧化钾溶液和氢氧化钠溶液；

(2)制备高浓度表面增强拉曼光谱活性基底

取质量比为1～2％的氯金酸溶液4.5～4.8mL，将其加入到90～100mL的超纯水中的纯水中，加热至95～100℃，逐滴加入质量比为0.1～0.2％的柠檬酸钠溶液，持续煮沸并搅拌20分钟后冷却至室温，得到稳定的红色表面增强拉曼光谱活性基底——金胶；

将所述金胶放入离心管内高速离心5～10分钟，取下层高浓度金胶胶体以备用；

(3)制备纳米探针

取浓度为10^-3～10^-4M的次氯酸识别分子溶液，将其与步骤(2)获得的高浓度金胶胶体混合均匀，静置10～20分钟；然后将其放入离心管内高速离心5～10分钟，取出上清液后将底部高浓度混合物重新分散，获得纳米探针；

(4)建立特征峰强度-浓度标准曲线图

将步骤(3)获得的纳米探针用便携式拉曼光谱仪对次氯酸钠溶液进行表面增强拉曼光谱检测，获得其用于定性分析的表面增强拉曼光谱指纹图谱，建立特征峰强度-浓度标准曲线图，可用于定量分析；

(5)获得细胞中次氯酸的表面增强拉曼光谱图

取适量步骤(3)获得的纳米探针加入到细胞培养液中，使所述纳米探针孵化到样品细胞内；用便携式拉曼光谱仪对细胞中次氯酸进行表面增强拉曼光谱检测以获得该样品细胞中次氯酸的表面增强拉曼光谱图；

(6)对照和检测

将步骤(5)检测得到的表面增强拉曼光谱图与步骤(4)获得的表面增强拉曼光谱指纹图谱以及特征峰强度-浓度标准曲线图进行比较，定性和定量分析步骤(5)检测的细胞中的次氯酸。

2.根据权利要求1所述的细胞中次氯酸原位快速检测方法，其特征在于，步骤(1)所述的酸溶液为氯化氢溶液。

3.根据权利要求1所述的细胞中次氯酸原位快速检测方法，其特征在于，步骤(2)所述的纯水为超纯水。

4.根据权利要求1所述的细胞中次氯酸原位快速检测方法，其特征在于，以步骤(2)的方法制备表面增强拉曼光谱活性基底——银胶胶体，具体方法如下：

取硝酸银溶于纯水，配制质量比为0.01～0.02％的硝酸银溶液，加热至90～95℃，逐滴加入质量比为0.01～0.02％柠檬酸钠溶液，持续煮沸并搅拌20分钟后冷却至室温，得到稳定的灰色表面增强拉曼光谱活性基底——银胶；将其放入离心管内高速离心5～10分钟，取下层高浓度银胶胶体备用。