[发明专利]FOXL2启动子基因的重组与构建的模型及应用

摘要

本发明涉及人插头转录因子FOXL2启动子荧光素酶报告基因的重组与构建的模型及应用。利用基因工程技术从人类基因组中扩增得到了1931 bp的FOXL2启动子序列，并克隆到了pGL3‑luc载体上，构建Pro‑FOXL2luc表达载体。DLR检测证实FOXL2表达受启动子区域的调控，构建FOXL2启动子模型是筛选哪些中药成分能抑制卵巢癌的关键步骤。通过此模型，筛选药物用于抑制FOXL2启动子的转录，可以为临床治疗提供理论依据和用药筛选模式。

主权项

一种FOXL2 启动子模型，其特征在于，将含有 FOXL2 启动子序列和荧光素酶报告基因的重组质粒转染到人宫颈癌细胞（Hela）中，构建 Hela 细胞 FOXL2 启动子模型，所述的FOXL2 启动子序列为Seq NO.1：cagggattct gcggaagtgc tgcttccccc atgtctgttg ggtgcagtgg gagaccgcccataaaaaaaa ccaagctact ttggggatag ccttgctccc tctcatcctt gtgaccaggcaagggctgcc ctgctgacct ctctggtgtc atcttcaaga tgctgaattc caaagagccctaccaccctt gtcctccctc cctttcatct cagaatgcag atcagaggcc tgagtgagcagcagacaaca cttgtagatg gcctgtggat gctggaacca caggccgctg aaggctccttgggcttcagg agaaccctca gagtctaaac agcctgggag gaagaggcag tgacaggcattgagtcagcc actccagaca tgccaatcac taatgcacag ctatatgaca tccattcagtccaccttcct ccataaggtg gccttgcccc cctcctcagc accaaggagt ttggggcttgaggattcaaa acactggcca tctctctcat actttatgac tgcagacttt ttgtttaggccaagttaaaa ggcactgtta aggagcacac tgttaaaagg cacacctgat tttccctgaaacaatctctg tacatgctga aataattgga ttcccatcag aattctgctt aaggtaggtgacaactaact cctgattctt tggagaaaga tcagaacaaa tgtctcatca ggagagagatttgaacaagt ccctccctca gcctgatgtt tgtcttccca gtctgtggca aaatacatacactgggaggg aaagaggcat cgaagaattg tgaaagaaag gaagaaaggg gggaaggaaagaagtaagaa aggagaaaaa gagaagatgc tatatccacc agctacattt actctaatacttgatgaaca tattacataa ctatcagtat aagtgtgttt tacctcgtaa atacaaatctcacaccttgt acatgtgcat acctgtgttt ctgagcagca cacatgcacc tggtatctcacccatctcaa ggacagctcc tctccatgac ttccatatgt gacccctgtg cacacacatacacagtcccg caaagtcccg ggcaacagcc ccgcctgtgt tagtgcaata gctgaggggcatctacttgg tgctgttaaa gcacacatcc aaccttcact ccaaccccgt aggattagtacacggattcc tggttcctag atccactggt aacgcaggga gaggcagagg tgattcaggcggcgcccctg acgactattt ccagagatcc tctcccctgc cccattccag cccagtcactctgagagcgc gagggacagg ccaggccgag gcttcttcgt acagtcacac ccgtttctgggctgactttc ccaaagcctc agagcagctc tccccaccct accccgtcca gccccctcgccgtctcgccc ctccccagcc ccgagctaga agttcagcct caagacggca gcaaacggcagagcaaagga gtcgttttct ttcacctgaa agccgcgagg aggcttggag cgcctttcctcgctggggcc cgagcttcct gggctttggc cgggtgcggg cagaccccac cggggtcctcgtcatctccc agcccagccc gcagagcgag taccggcaga tttcaagggc gcgtgagcctggctgtcggc tgggcccctg aggctcgctg ggcgggggca ggccggtcca ggctgtgcggggcgtttaca aaaagtgact tggagatgaa ctcgcccgtg cgcggctggc cgccccgctataggggcgaa ggcgcctgac gcaagcggaa ctcggtggag cccatacgaa tcagaacagagcgaggctcc tggcgcacta gggactccag gaggcagctc cgccagagac gcgggtcgtgcttcgggaaa c；用PrimerPremier 5.0 设计扩增 FOXL2 启动子的引物，以正常的人类基因组为模板进行 PCR，将扩增得到的FOXL2 启动子片段构建 proFOXL2‑pMD19‑T 载体，经过双酶切鉴定并测序后，将片段亚克隆到 pGL3‑basic 和 pGL3‑enhancer 载体上，构建proFOXL2‑Basic 和 proFOXL2‑Enhancer 重组质粒，经过双酶切鉴定和测序验证，实现了 FOXL2 启动子‑luc 表达载体的重组。