[发明专利]FOXL2启动子基因的重组与构建的模型及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，特别是涉及FOXL2 启动子基因的重组与构建的模型及应用。

背景技术

卵巢颗粒细胞瘤（GCT）是一种少见的卵巢功能性肿瘤，占卵巢肿瘤的2%~5%，可以分为成年型 GCT 和幼年型 GCT，其病因迄今尚未阐明。手术是治疗卵巢 GCT 的首选治疗方法，但是往往预后不理想，具有远期复发的特点，需要长期随访治疗。到目前为止，尚无有效治疗药物，因此开发有效的治疗药物及方法具有重要的现实意义。

FOXL2（winged helix/forkhead transcription factor gene 2）是一段在卵巢发育及功能维持中发挥重要作用的基因[Ottolenghi C, Uda M, Crisponi L, Omari S, Cao A, et al. (2007) Determination and stability of sex.Bioessays 29: 15-25.]。在人体中，FOXL2 蛋白在未成熟的生殖腺即有表达，在卵巢颗粒细胞的表达贯穿妇女的整个育龄期[Pisarska MD, Kuo F-T, Bentsi-Barnes IK, Khan S, Barlow GM (2010) LATS1 phosphorylates forkhead L2 and regulates its transcriptional activity.American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism 299: E101-E109.]。此外，该基因在女性卵巢颗粒细胞的增殖分化及功能维持中发挥重要作用，是卵泡发育必须的细胞因子，缺乏 FOXL2 的颗粒细胞会停滞于鳞状向立方形细胞的转化过程中，无法形成次级卵泡[Irusta G, Pazos MC, Abramovich D, De Zúñiga I, Parborell F, et al. (2013) Effects of an inhibitor of the gamma-secretase complex on proliferation and apoptotic parameters in a FOXL2-mutated granulosa tumor cell line (KGN). Biology of reproduction 89: 1-9.]。2014 年有数篇研究报道了其与卵巢颗粒细胞瘤之间的关系[McConechy MK, Farkkila A, Yang W, Andersson N, Ng Y, et al. (2014) Circulating tumor DNA:FOXL2 402C-G mutation can be identified in plasma from adult granulosa cell tumor patients with recurrent disease. Cancer Research 74: 5610-5610； Rosario R, Cohen PA, Shelling AN (2014) The role of FOXL2 in the pathogenesis of adult ovarian granulosa cell tumours. Gynecologic oncology 133: 382-387；Anttonen M, Pihlajoki M, Andersson N, Georges A, L'Hôte D, et al. (2014) FOXL2, GATA4, and SMAD3 co-operatively modulate gene expression, cell viability and apoptosis in ovarian granulosa cell tumor cells. PloS one 9: e85545.]，证实随该病的临床分期升高，卵巢颗粒细胞瘤组织中 FOXL2 的表达水平显著升高。我们研究发现在Hela细胞中，采用抑制剂抑制FOXL2的表达后，细胞的生长受到显著抑制。因此，筛选能够抑制 FOXL2 表达进而抑制卵巢癌细胞生长的药物对治疗该病具有重要意义。

发明内容