[发明专利]一种胸腺法新的合成方法

摘要

本发明涉及一种胸腺法新的合成方法，采用先三段(片段1～8、片段9～18和片段19～28)分别合成，再片段间进行缩合的方法。本发明的合成方法可以有效的提高粗品的纯度，降低杂质含量，使之易于纯化，从而降低成本，更加适合于工业化生产。

主权项

1.一种胸腺法新的合成方法，采用先三段(片段1～8、片段9～18和片段19～28)分别合成，再片段间进行缩合的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)将Fmoc‑Asn(Trt)‑OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2‑氯三苯甲基(CTC)树脂在DMF溶液中混合，加入DIEA溶液，经酯化反应得到Fmoc‑Asn(Trt)‑CTC树脂；(2)将Fmoc‑Asn(Trt)‑CTC树脂和体积比10％‑50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H2N‑Asn(Trt)‑CTC树脂，将Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH和H2N‑Asn(Trt)‑CTC树脂耦合，得到Fmoc‑Glu(OtBu)‑Asn(Trt)‑CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc‑Glu(OtBu)‑Val‑Val‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Glu(OtBu)‑Asn(Trt)‑CTC(片段1‑8)树脂；将Fmoc‑Glu(OtBu)‑Val‑Val‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Glu(OtBu)‑Asn(Trt)‑CTC(片段1‑8)树脂加入10％‑50％哌啶/DMF溶液分别脱Fmoc保护基10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂；(3)将Fmoc‑Lys(Boc)‑OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2‑氯三苯甲基(CTC)树脂混合，经酯化反应得到Fmoc‑Lys(Boc)‑CTC树脂；(4)将Fmoc‑Lys(Boc)‑CTC树脂和体积比10％‑50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H2N‑Lys(Boc)‑CTC树脂，将Fmoc‑Lys(Boc)‑OH和H2N‑Lys(Boc)‑CTC树脂耦合，得到Fmoc‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc‑Ile‑Thr(tBu)‑Thr(tBu)‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑CTC(片段9‑18)树脂；将Fmoc‑Ile‑Thr(tBu)‑Thr(tBu)‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑CTC(片段9‑18)树脂加入10％‑50％哌啶/DMF溶液分别脱Fmoc保护基10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂；(5)将Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2‑氯三苯甲基(CTC)树脂混合，经酯化反应得到Fmoc‑Glu(OtBu)‑CTC树脂；(6)将Fmoc‑Glu(OtBu)‑CTC树脂和体积比10％‑50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H2N‑Glu(OtBu)‑CTC树脂，将Fmoc‑Ser(tBu)‑OH和H2N‑Glu(OtBu)‑CTC树脂耦合，得到Fmoc‑Ser(tBu)‑Glu(OtBu)‑CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Ala‑Ala‑Val‑Asp(OtBu)‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Glu(OtBu)‑CTC(片段19‑28)树脂；(7)将片段19‑28树脂，加入10％‑50％哌啶DMF溶液分别脱保护10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂，使用乙酸酐和有机碱对片段19‑28N末端氨基乙酰化得到Ac‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Ala‑Ala‑Val‑Asp(OtBu)‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Glu‑CTC(片段Ac‑19‑28)树脂；(8)用含5％TFA的DCM溶液将步骤(2)、步骤(4)和步骤(7)中合成的带侧链保护基的肽片段从树脂上切落，得到H2N‑Glu(OtBu)‑Val‑Val‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Glu(OtBu)‑Asn(Trt)‑OH(片段1‑8)，H2N‑Ile‑Thr(tBu)‑Thr(tBu)‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑OH(片段9‑18)，Ac‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Ala‑Ala‑Val‑Asp(OtBu)‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Glu(OtBu)‑OH(片段19‑28)；(9)片段合成选用HBTU、HATU或TBTU中的一种，HOBT、HOAT或6‑Cl‑HOBT中的一种，DIEA或NMM中的一种，即3种试剂的组合作为缩合试剂，带保护基的氨基酸的用量是1.5～2.5倍量，先将片段9‑18用V(DMF)/V(DCM)等于3.0的溶剂溶解，后加入等摩尔量的HBTU、HATU或TBTU中的一种和HOBT、HOAT或6‑Cl‑HOBT中的一种，待溶解后滴加2倍摩尔量的DIEA或NMM中的一种，30分钟后将反应溶液倒入到用NMP溶解的片段1‑8溶液中，反应完全后得到片段1‑18，以同样的方法得到多肽1‑28；(10)向多肽1‑28中加入切割试剂A、B或C中的一种，脱去保护基后加入冰乙醚沉淀，过滤，冰乙醚洗涤，减压干燥得胸腺法新粗品，其中A为TFA、茴香硫醚、水、苯酚和EDT组成的混合溶液，其体积比为82.5：5：5：5：2.5；B为TFA、茴香硫醚、茴香醚和EDT组成的混合溶液，其体积比为90:5:3:2；C为TFA、Tis和水组成的混合溶液，其体积比为95：2.5：2.5。