[发明专利]一种胸腺法新的合成方法

说明书

本发明涉及一种胸腺法新的合成方法，采用先三段(片段1～8、片段9～18和片段19～28)分别合成，再片段间进行缩合的方法。本发明的合成方法可以有效的提高粗品的纯度，降低杂质含量，使之易于纯化，从而降低成本，更加适合于工业化生产。

技术领域

本发明属医药技术领域，涉及一种胸腺法新的合成方法。

背景技术

胸腺法新，曾用名胸腺素α1、胸腺肽α1，是一种新型免疫调节因子，1997年由意大利赛生(Sciclone)公司开发上市，商品名称“日达仙”(Zadaxin)，临床上应用胸腺法新提高T细胞的免疫功能，治疗病毒性肝炎和延缓某些老年病的发生与发展。另外，胸腺法新还有抗感染、抗病毒和抗肿瘤的功效，尤其对癌症的免疫性治疗也具有一定的作用。

目前胸腺法新的合成方式主要有两种，一种为Boc策略，一种为Fmoc策略，Boc策略由于用到剧毒的HF，现在已经较少使用。关于Fmoc策略有较多的报道，如《天津药学》2001年第13卷第3期《Fmoc新型固相法合成胸腺素α1及其反应途径》描述了以HMP树脂为载体，以DCC-HOBT为耦合剂合成胸腺法新的方法；《化工学报》2004年第55卷第2期《胸腺素α1的DIC固相化学合成与鉴定》描述了以王树脂为载体，以DIC-HOBT为耦合剂合成胸腺法新的方法；专利CN101104638A描述了以Fmoc-RinkAmideMBHA树脂和Fmoc-Asp-X合成胸腺法新的方法；专利CN102199205A描述了以羟基官能团树脂为载体，以DIC-HOBT为耦合剂合成胸腺法新的方法。

目前合成工艺中存在以下问题：首先，在多肽序列的某些氨基酸残基处，经多次的缩合反应会引起侧链反应；其次，随着肽段的延伸，其溶解性降低，可能形成分子内的折叠结构，即存在所谓“困难序列”，使氨基酸缩合反应很难进行彻底，而且脱除氨基保护基团Fmoc也很困难。这些问题都将导致副产物不断累积，使得在最终的粗品中存在大量的缺失肽及空心肽，目标产物肽收率低，并且这些杂质与目标肽在结构上很相似，难以纯化。

本发明采用分段合成的策略，可以有效改善或解决上述问题，缩短了合成周期、提高了粗品的纯度，更有利于工业化生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种胸腺法新的合成方法，采用先三段(片段1～8、片段9～18和片段19～28)分别合成，再片段间进行缩合的方法。

为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究，最终获得了如下技术方案：

一种胸腺法新的合成方法，采用先三段(片段1～8、片段9～18和片段19～28)分别合成，再片段间进行缩合的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

(1)将Fmoc-Asn(Trt)-OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2-氯三苯甲基(CTC)树脂在DMF溶液中混合，加入DIEA溶液，经酯化反应得到Fmoc-Asn(Trt)-CTC树脂；

(2)将Fmoc-Asn(Trt)-CTC树脂和体积比10％-50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H₂N-Asn(Trt)-CTC树脂，将Fmoc-Glu(OtBu)-OH和H₂N-Asn(Trt)-CTC树脂耦合，得到Fmoc-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-CTC(片段1-8)树脂；将Fmoc-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-CTC(片段1-8)树脂加入10％-50％哌啶/DMF溶液分别脱Fmoc保护基10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂。