[发明专利]一种胸腺法新的合成方法

权利要求书

1.一种胸腺法新的合成方法，采用先三段分别合成，所述三段分别是片段1～8、片段9～18和片段19～28，再片段间进行缩合的方法，其特征在于该方法包括以下步骤： (1)将Fmoc-Asn(Trt)-OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2-氯三苯甲基(CTC)树脂在DMF溶液中混合，加入DIEA溶液，经酯化反应得到Fmoc-Asn(Trt)-CTC树脂；

(2)将Fmoc-Asn(Trt)-CTC树脂和体积比10％-50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H₂N-Asn(Trt)-CTC树脂，将Fmoc-Glu(OtBu)-OH和H₂N-Asn(Trt)-CTC树脂耦合，得到Fmoc-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)- Asn (Trt)-CTC树脂，即片段1-8树脂；将所述片段1-8树脂加入10％-50％哌啶/DMF溶液分别脱Fmoc保护基10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂；

(3)将Fmoc-Lys(Boc)-OH和替代值为0 .3mmol/g～0 .8mmol/g的2-氯三苯甲基(CTC)树脂混合，经酯化反应得到Fmoc-Lys(Boc)-CTC树脂；

(4)将Fmoc-Lys(Boc)-CTC树脂和体积比10％-50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H₂N-Lys(Boc)-CTC树脂，将Fmoc-Lys(Boc)-OH和H₂N-Lys(Boc)-CTC树脂耦合，得到Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu (OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-CTC树脂，即片段9-18树脂；将所述片段9-18树脂加入10％-50％哌啶/DMF溶液分别脱Fmoc保护基10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂；

(5)将Fmoc-Glu(OtBu)-OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2-氯三苯甲基(CTC)树脂混合，经酯化反应得到Fmoc-Glu(OtBu)-CTC树脂；

(6)将Fmoc-Glu(OtBu)-CTC树脂和体积比10％-50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H₂N-Glu(OtBu)-CTC树脂，将Fmoc-Ser(tBu)-OH和H₂N-Glu(OtBu)-CTC树脂耦合，得到Fmoc-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser (tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-CTC树脂，即片段19-28树脂；

(7)将片段19-28树脂，加入10％-50％哌啶DMF溶液分别脱保护10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂，使用乙酸酐和有机碱对片段19-28N末端氨基乙酰化得到Ac-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)- Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu-CTC树脂，即片段Ac-19-28树脂；所述有机碱为吡啶、NMM或DIEA中的一种，乙酸酐摩尔量为树脂摩尔量的5～10倍，有机碱摩尔量为树脂摩尔量的1～5倍；

(8)用含5％TFA的DCM溶液将步骤(2)、步骤(4)和步骤(7)中合成的带侧链保护基的肽片段从树脂上切落，得到H₂N-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-OH，即片段1-8，H₂N-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp (OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OH，即片段9-18，Ac-Ser(tBu)- Asp(OtBu)-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-OH ，即片段19-28；

(9)片段合成选用HBTU、HATU或TBTU中的一种，HOBT、HOAT或6-Cl-HOBT中的一种，DIEA或NMM中的一种，即3种试剂的组合作为缩合试剂，带保护基的氨基酸的用量是1 .5～2 .5倍量，先将片段9-18用V(DMF)/V(DCM)等于3 .0的溶剂溶解，后加入等摩尔量的HBTU、HATU或TBTU中的一种和HOBT、HOAT或6-Cl-HOBT中的一种，待溶解后滴加2倍摩尔量的DIEA或NMM中的一种，30分钟后将反应溶液倒入到用NMP溶解的片段1-8溶液中，反应完全后得到片段1-18，以同样的方法将片段19-28与片段1-18反应得到多肽1-28；

(10)向多肽1-28中加入切割试剂A、B或C中的一种，脱去保护基后加入冰乙醚沉淀，过滤，冰乙醚洗涤，减压干燥得胸腺法新粗品，其中A为TFA、茴香硫醚、水、苯酚和EDT组成的混合溶液，其体积比为82 .5：5：5：5：2 .5；B为TFA、茴香硫醚、茴香醚和EDT组成的混合溶液，其体积比为90:5:3:2；C为TFA、Tis和水组成的混合溶液，其体积比为95：2.5：2.5。