[发明专利]一种快速定量检测芽孢杆菌发酵液中营养体和芽孢体的方法

摘要

本发明提供了一种从芽孢杆菌发酵液中快速定量检测芽孢体和营养体的方法。包括芽孢萌发、营养体细胞NADH的提取及其荧光检测。将营养体细胞离心得菌体，经提取NADH并测定荧光强度；然后将芽孢细胞经过萌发剂萌发，在细胞不显著增殖的前提下在细菌培养液混合1.5h得到由芽孢转化成的营养体细胞，检测细胞NADH含量，最后通过增加的NADH含量计算出芽孢的浓度。本发明可适用于基于芽孢杆菌纯培养的发酵体系，尤其是以芽孢杆菌作为发酵剂生产微生态制剂，能实现发酵过程监控或者终端产品的快速、灵敏测定。亦可用于食品、环境中的芽孢数量的定量检测。

主权项

1.一种快速定量检测芽孢杆菌发酵液中营养体和芽孢体的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将待测的芽孢杆菌发酵液离心、洗涤并重悬到缓冲液中，充分混匀后得到菌悬液；(2)量取菌悬液，对菌悬液中的NADH进行提取，提取液采用浓度为1.5～2mol/L的KOH乙醇溶液，将提取液与菌悬液按照不小于3：1的体积比充分混合均匀，加热至80～90℃，在此温度下处理30～60分钟，处理完毕后离心取上清液，检测上清液中NADH的荧光强度，记录检测结果；(3)再次量取步骤(1)中的菌悬液，将其放在含有外在萌发剂的培养基中进行培养，培养至菌悬液中的芽孢体充分萌发变成营养体，然后采用与步骤(2)中相同的方法对培养后的菌悬液中的NADH进行提取，并检测上清液中NADH的荧光强度，记录检测结果；(4)取已知初始活菌浓度的营养体悬液，分别进行稀释，然后采用与步骤(2)中相同的NADH提取及荧光强度检测方法，作出活菌浓度与NADH荧光强度的关系曲线，并以此曲线作为标准曲线分别计算出步骤(2)和步骤(3)中荧光强度检测结果所对应的活菌浓度值，其中步骤(2)所对应的活菌浓度值即为营养体浓度值，将步骤(3)所对应的活菌浓度值减去步骤(2)所对应的活菌浓度值即为芽孢体浓度值。