[发明专利]一种高压脉冲电场偶联生物酶解制备鲍鱼内脏磷脂的方法

摘要

本发明涉及一种高压脉冲电场偶联生物酶解制备鲍鱼内脏磷脂的方法，属于水产食品精深加工领域。该方法制备步骤依次为：原料预处理、PEF偶联生物酶解、脂质提取、硅胶柱层析分离磷脂、蛋白提取、醇提多糖等手段，依次得到鲍鱼中磷脂、中性脂肪、蛋白、多糖、色素等。本发明操作工艺简单，成本低，针对我国鲍鱼产业加工中的副产品——内脏进行精深加工和综合利用，制备得到的鲍鱼磷脂、蛋白、多糖和色素等可作为中间原料应用于食品、医药等各个领域。本发明技术适用于各种规模的工业化生产，有效解决鲍鱼生产加工业的废弃物排放。

主权项

1.一种高压脉冲电场偶联生物酶解制备鲍鱼内脏磷脂的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）原料预处理：将清洗干净的鲍鱼内脏按固液重量比1：5~1：10加入蒸馏水，并用高速组织捣碎机，转速10000r/min将其打浆；2）高压脉冲电场与酶解偶联：绞成浆后的鲍鱼内脏置于配料缸，进行15~20 min的高压脉冲电场处理；用0.2 M PBS缓冲溶液调pH至5.5~8.0，加入复合蛋白酶，40~55 ℃酶解1~3 h，90 ℃灭酶10~20 min；4000 rpm离心10~20 min除去不溶物，收集鲍鱼内脏提取物的上清液A；3）脂质提取：用正己烷浸提2）中上清液A，萃取得到鲍鱼总脂和水溶液B；总脂用3~6倍体积丙酮洗涤，得到丙酮不溶物用甲醇溶解，‑20 ℃备用；4）磷脂分离：将3）提取到的丙酮不溶物的甲醇溶液装入硅胶层析柱，分别用8~12倍体积的甲醇、氯仿和丙酮冲洗，收集洗脱液，进行旋蒸；5）蛋白分离：调节步骤3）收集到的水溶液B的pH至5.0~5.5，4000 rpm离心10‑20 min沉淀蛋白，冷冻干燥，备用；收集上清液C；6）鲍鱼多糖提取：将步骤5）获得的上清液C浓缩后加入95wt%乙醇，4 ℃下沉淀10~12 h，4000 rpm离心10~20 min获得多糖沉淀；将多糖重新溶解于蒸馏水，95wt%乙醇反复醇沉3‑5次，收集沉淀物，冷冻干燥得到鲍鱼多糖；在步骤2）中的高压脉冲电场处理条件为：电场强度20~40 KV/cm，脉冲时间350~450 μS，脉冲频率200‑400 Hz。