[发明专利]一种高压脉冲电场偶联生物酶解制备鲍鱼内脏磷脂的方法

权利要求书

1.一种高压脉冲电场偶联生物酶解制备鲍鱼内脏磷脂的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）原料预处理：将清洗干净的鲍鱼内脏按固液重量比1：5~1：10加入蒸馏水，并用高速组织捣碎机，转速10000r/min将其打浆；

2）高压脉冲电场与酶解偶联：绞成浆后的鲍鱼内脏置于配料缸，进行15~20 min的高压脉冲电场处理；用0.2 M PBS缓冲溶液调pH至5.5~8.0，加入复合蛋白酶，40~55 ℃酶解1~3h，90 ℃灭酶10~20 min；4000 rpm离心10~20 min除去不溶物，收集鲍鱼内脏提取物的上清液A；

3）脂质提取：用正己烷浸提2）中上清液A，萃取得到鲍鱼总脂和水溶液B；总脂用3~6倍体积丙酮洗涤，得到丙酮不溶物用甲醇溶解，-20 ℃备用；

4）磷脂分离：将3）提取到的丙酮不溶物的甲醇溶液装入硅胶层析柱，分别用8~12倍体积的甲醇、氯仿和丙酮冲洗，收集洗脱液，进行旋蒸；

5）蛋白分离：调节步骤3）收集到的水溶液B的pH至5.0~5.5，4000 rpm离心10-20 min沉淀蛋白，冷冻干燥，备用；收集上清液C；

6）鲍鱼多糖提取：将步骤5）获得的上清液C浓缩后加入95wt%乙醇，4 ℃下沉淀10~12h，4000 rpm离心10~20 min获得多糖沉淀；将多糖重新溶解于蒸馏水，95wt%乙醇反复醇沉3-5次，收集沉淀物，冷冻干燥得到鲍鱼多糖；

在步骤2）中的高压脉冲电场处理条件为：电场强度20~40 KV/cm，脉冲时间350~450 μS，脉冲频率200-400 Hz。

2.一种如权利要求1所述高压脉冲电场偶联生物酶解制备鲍鱼内脏磷脂的方法，其特征在于：在步骤2）中离心除去的不溶物经60~70℃的热风干燥，用作动物饲料。

3.一种如权利要求1所述高压脉冲电场偶联生物酶解制备鲍鱼内脏磷脂的方法，其特征在于：在步骤2）中的复合蛋白酶为：AS.1398中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的三种组合，总添加量为原料重量的0.1~1%。